多重免疫荧光染色(mIHC)技术,结合了免疫荧光(IF),免疫组化(IHC)和原位杂交(ISH)的技术特点,以酪胺信号放大技术(TSA)为基础,使得一张切片呈现多个靶标的集成化染色。相比于传统的IHC来说,多重免疫荧光的染色分辨率更高,荧光信号更强、更加稳定,并且不限制一抗种属大大降低了实验成本。
酪酰胺信号放大(Tyramide Signal Amplification, TSA)是一类利用辣根过氧化物酶(HRP)对靶蛋白或核酸进行高密度原位标记的酶学检测方法,可在同一组织切片上进行多种抗原标记,是一种多标记的免疫荧光染色技术,广泛应用于ELISA、ISH、IHC等实验中。
多重免疫荧光VS传统免疫荧光:
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基于TSA的多重免疫荧光 |
传统免疫荧光 |
靶点数目 |
不受限制(最多可同时染色7-10种) |
一般标记3种(含DAPI),三种以上标记难度大 |
一抗种类 |
同一种属的不同抗体即可满足要求 |
不同种属的不同抗体 |
二抗种类 |
连接辣根过氧化物酶的同种属二抗 |
连接荧光探针的不同种属二抗 |
染色策略 |
任何样本无需任何染色策略,操作简单,样本以及靶点的差异性不影响染色过程 |
样本抗原的空间位置有差异,以及样本以及靶点的差异性会影响染色过程,导致过程复杂多变 |
染色效果 |
1. 染色分辨率及特异性高 2. 信号强度更强、更稳定 3. 沼灭时间更长,无背景影响 4. 各靶点的信噪比提高,适合组织基于单细胞的定量分析 |
1. 亮度较弱,容易淬灭; 2. 各种抗体检存在互相影响; 3. 对单细胞的定量分析不利; |
实验成本 |
1. 可节省抗体用量; 2. 操作简单,无需预实验,减少实验损耗; |
1. 抗体用量更多、种类更复杂,成本增加; 2. 需要寻找合适的染色策略; |
TSA主要原理是利用酪胺Tyramide的过氧化物酶反应(酪胺盐在HRP催化H2O2下形成共价键结合位点),产生大量的酶促产物,该产物能与周围的蛋白残基(包括色氨酸、组氨酸和酪氨酸残基)结合,这样在抗原-抗体结合部位就有大量的生物素沉积,与随后加入的Streptavidin—HRP/荧光基团结合,经几次这样的循环放大,可以结合大量的酶分子或荧光基团,结果使其检测信号得到几何级放大。
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应用范围广:可用于IHC、ICC、FISH等实验;
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操作简单:工作流程与IHC、ICC、FISH等实验相似,仅需增加一个简单的孵育步骤对样本进行处理,就可以得到多色标记信号;
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灵敏度高:比传统IHC、ICC、FISH等方法高100倍;
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节约实验成本:可减少抗体或探针用量,提供更高的抗体稀释比例,降低了抗体的非特异性结合;
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高分辨率及低背景:检测试剂更高程度的稀释能够降低非特异性标记;
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兼容性高且多色共定位检测:与多种染料和检测系统兼容,可以进行多色标记以及共定位检测。

产品名称 |
货号 |
规格 |
60405ES03 |
1 kit |
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60406ES03 |
1 kit |
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60407ES03 |
1 kit |
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TSA Multi-colour Immunofluorescence System Kit (4-Color) 酪酰胺信号放大多重标记试剂盒(四色法) |
60410ES03 |
1 kit |
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