产品信息

产品描述

4×Hifair^® V nCov II Multiplex One Step RT-qPCR Probe Kit是以RNA为模板进行多重定量PCR反应的试剂盒。在实验的过程中，逆转录和定量PCR在同一反应管中进行，简化了实验操作，降低了污染的风险。

本试剂盒利用耐热Hifair^® V Reverse Transcriptase高效合成第一链cDNA，并利用UNICON^® HotStart Taq DNA Polymerase进行定量扩增。本试剂盒主要包含优化的MP Buffer，Enzymes Mix等，缓冲液中已含有Mg²⁺和dNTP等，并添加了有效抑制非特异性PCR扩增的因子和提升多重qPCR反应扩增效率的因子，能够保证引物扩增效率的同时，进行多达四重的反应。

产品组分

【注】a) 4×Hifair^® V MP Buffer为Multiplex One Step RT-qPCR Probe Buffer的简写。

b) 不含Rox reference dye。如需，推荐使用货号10200ES产品。

c) Hifair^® V Enzyme Mix主要包含Hifair^® V Reverse Transcriptase、RNase inhibitor和UNICON^® HotStart Taq DNA Polymerase。

适用机型

ABI系列：ABI 5700, 7000, 7300, 7700, 7900HT Fast, StepOne, StepOne Plus; 7500, 7500 Fast, ViiA7, QuantStudio 3 and 5, QuantStudio 6, 7, 12k Flex;

Bio-Rad系列：Bio-Rad CFX96, CFX384, iCycler iQ, iQ5, MyiQ, MiniOpticon, Opticon, Opticon 2, Chromo4;

Roche系列：Roche Applied Science LightCycler 480, LightCycler 2.0; Lightcycler 96;

其他系列：Stratagene MX3000P, MX3005P, MX4000P;

Eppendorf Mastercycler ep realplex, realplex 2 s;

Qiagen Corbett Rotor-Gene Q, Rotor-Gene 3000, Rotor-Gene 6000;

Thermo Scientific PikoReal Cycler; Cepheid SmartCycler; Illumina Eco qPCR.

运输与保存方式

冰袋运输。-20℃保存，有效期1年。本品避免反复冻融。建议分装保存。

注意事项

1. 实验过程中请使用RNase free耗材。

2. 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

反应体系（以25 μL体系为例说明）

【注】：使用前务必充分混匀，避免剧烈震荡产生过多气泡。

a) 引物和探针浓度：Primer/Probe Mix中包含多对引物和探针，通常每条引物终浓度为0.4 μM，也可以根据情况在0.1-1.0 μM间进行调整；每条探针的浓度可根据具体情况在50-300 nM间调整。

b) 模板稀释：qPCR灵敏度极高，建议将模板进行稀释使用，控制Ct值在在20-35之间适宜。

c) 反应体系：推荐使用25 μL或50 μL，以保证目的基因扩增的有效性和重复性。

d) 体系配制：请于超净工作台内配制，并使用无核酸酶残留的枪头、反应管；推荐使用带滤芯的枪头。避免交叉污染和气溶胶污染。

标准扩增程序

【注】

a) 逆转录：42℃或者50℃均可，时间10-15 min。

b) 扩增反应：扩增反应温度根据设计的引物Tm值进行调整。CDC 官方推荐的 ORF1ab和N引物，退火温度建议≥60℃。

c) 荧光信号采集：不同的qPCR检测仪器所需的荧光信号采集时间不同，请根据最短时间限制进行设置。

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