图1. dUTP/UDG酶防污染系统去除残留扩增污染物示意图

目前市售UDG酶主要包括大肠杆菌和枯草芽孢杆菌来源的普通UDG酶及嗜冷海洋细菌来源的热敏型UDG酶两种类型。普通UDG酶较为耐热，经95℃、10 min处理仍会残留有少量的尿嘧啶-DNA糖基化酶活性，可能存在对靶标含dU扩增产物的降解作用。此外，由于商业化分子酶主要采用工程菌株（如大肠杆菌等）进行重组表达，因此分子酶中会存在一定量的宿主基因组DNA残留。加上制备环境和人源等因素影响，分子酶制品中极易存在污染DNA。在病原体检测过程中，污染的DNA可能会淹没低丰度的靶标核酸或和靶标核酸一起被检出，从而影响结果的判读。

为解决病原检测背景菌干扰问题，翌圣已建立完善的UCF.ME®超低残留分子酶研发、生产平台。通过对物料、环境、工艺、过程、质量等多环节把控，目前可规模化提供用于RT-qPCR检测，NGS建库的全套高性能、超低残留分子酶原料，助力解决病原检测中的背景菌干扰，提高检测准确度。

图2. 翌圣超低残留分子酶研发、生产环节把控

翌圣UCF.ME® Uracil DNA Glycosylase (UDG/UNG), heat-labile, 1 U/μL (Cat#14466ES)来源于嗜冷海洋细菌，是一款UCF.ME®超低残留热敏UDG酶。该产品的使用可避免常规UDG酶灭活后可能存在的残留活性在常温下对含dU扩增产物的降解作用，同时防止分子酶中存在的背景菌造成PCR结果假阳性，因此在检测过程中引入UCF.ME®超低残留的热敏UDG酶，对于准确鉴别感染病原体，协助感染、传染病的临床诊断至关重要。

图3：使用14466ES配制qPCR mix，同时以不含UDG酶的qPCR mix为对照组，用于10⁵ copies/T dU-DNA产物的消化和扩增。结果显示：在14466ES投入量达0.05U/T时能完全消化10⁵ copies/T dU-DNA产物。

图4：取14466ES分别在下述条件：50℃，10min；55℃，5min；55℃，10min；95℃，5min进行热灭活处理，使用不同条件下灭活处理的14466ES配制成qPCR mix，同时以不含UDG酶的qPCR mix为对照组，用于dU-DNA产物的消化和扩增。结果显示：经过50℃，10min；55℃，5min；55℃，10min；95℃，5min热灭活处理后的14466ES均失去消化能力。