Th17细胞“变形”指南：新手也能看懂的分化实验趣味攻略

Th17细胞简介

Th17细胞是CD4⁺辅助性T细胞的重要亚群，因主要分泌IL-17得名，受转录因子RORγt调控，需TGF-β、IL-6启动分化，IL-23维持功能。它能通过招募中性粒细胞抵御胞外菌和真菌，尤其保护黏膜组织，是抗微生物免疫的关键；但过度活化会引发过度炎症，与类风湿关节炎、银屑病等自身免疫病及炎症性肠病密切相关，是相关疾病治疗的重要靶点。

图1. Th17细胞分化图^[1]

Th17细胞“变形”指南

今天我们的任务是将一个懵懂的“新兵”（初始CD4⁺ T细胞）成功“改造”成一名独特的“炎症战士”——Th17细胞。别担心，本指南将用最有趣的方式，带你通关这个经典的免疫学实验。

任务目标与“装备”清单

终级任务：在培养皿中，用特定的“信号因子”组合，成功诱导初始CD4⁺ T细胞转变为Th17细胞，并通过科学方法验证其身份。

核心装备清单：

装备类型	名称	注释
种子细胞	高纯度的初始CD4⁺ T细胞（Naive CD4⁺ T Cells）	分选自脾脏或外周血，纯度>90%是成功关键。
启动信号	TGF-β和IL-6	协同启动Th17分化程序，上调关键转录因子RORγt。
增强信号	IL-23	促进Th17细胞的扩增、功能稳定和存活。
屏蔽信号	抗IL-4和抗IFN-γ抗体	中和误导细胞分化为Th2或Th1的杂音信号。
激活信号	抗CD3/CD28抗体	预包被于板底，提供T细胞活化必需的抗原刺激。
后勤补给	完全RPMI 1640培养基	提供细胞生长所需的一切营养和适宜环境。

三步“变形”法

图2. Th17分化实验流程图

激活（“入伍动员”）

从小鼠脾脏或人外周血中，通过磁珠分选（MACS）或流式分选（FACS）获取高纯度的初始CD4+ T细胞。将分选好的“新兵”（初始CD4+ T细胞）放入已经建好的“训练场”（预包被了抗CD3/抗CD28抗体的培养板中），让细胞先被有效激活，进入备战状态。

诱导分化（“特种训练”）

在细胞激活的同时，立即加入我们配好的“特种训练套餐”（细胞因子和抗体）。

人源系统: TGF-β（3-5 ng/mL）+ IL-6（30-50 ng/mL）+ IL-23（20-30 ng/mL）+ 中和抗体（各1-10 μg/mL）
小鼠系统: TGF-β（1-3 ng/mL）+ IL-6（20-30 ng/mL）+ IL-23（10-20 ng/mL）+ 中和抗体（各1-10 μg/mL）

培养蜕变（“静待成长”）

将细胞放入37°C、5% CO₂的培养箱中培养3-5天。期间可以每隔1-2天半量更换新鲜培养基（含细胞因子），以维持信号强度并提供营养。

验收成果：如何鉴定你的“Th17战士”？

训练完成后，需要检验有多少细胞成功“转职”。

鉴定方法	检测目标	结果解读	优点
流式细胞术（金标准）	细胞内IL-17A蛋白	细胞群体中IL-17A阳性细胞的百分比	直接、定量，可在单细胞水平分析
流式细胞术（金标准）	核内转录因子RORγt	表达RORγt细胞的百分比	检测“身份指挥官”，更早、更本质
ELISA	培养上清中的IL-17A细胞因子	上清中IL-17A的浓度	功能验证，操作相对简单，可批量检测

新手避坑小贴士：

纯度至上：初始T细胞不纯是实验失败的首要元凶，务必保证分选纯度。
细胞因子活性：确保细胞因子的活性和浓度，它们是诱导成功的直接驱动力。
勿忘“清道夫”：抗IL-4/抗IFN-γ抗体一定要加，否则细胞极易分化为其他类型。
设对照：务必设置不加诱导因子（只激活）的阴性对照组，对比才有说服力！

现在，你已经掌握了从“新兵”到“战士”的全套培训方案。准备好装备，带上翌圣HiActi细胞因子，开始你的细胞“变形”实验吧！

翌圣HiActi细胞因子

翌圣生物开发了一系列专为细胞培养而设计的HiActi^®细胞因子，经过严格的质量控制及细胞功能的验证，确保产品具有高活性、高纯度、高稳定性、低内毒素水平。使Th17分化的关键细胞因子是IL-6、IL-21（以自分泌的形式维持Th17细胞分化）和TGF-β，同时IL-23对Th17的维持和增殖具有重要作用。翌圣细胞因子可精准助力Th17细胞的分化，助你拿到理想的实验结果。

产品数据

Bioactivity of human IL-6

图3. The ED50 as determined by a cell proliferation assay using human TF-1 cells is 0.1-0.5 ng/mL.

Bioactivity of Human IL-23

图4. Measured by the (CAGA)12—luciferase reporter assay. The EC50 for this effect is 1.092 ng/mL.

Bioactivity of Human IL-23

图5. Measured by its ability to induce IL-17 secretion by mouse splenocytes. The EC50 for this effect is 0.25 pg/mL.

相关产品信息

产品名称	货号	规格
Recombinant Human IL-6 Protein 重组人白介素-6	90107ES	5μg/20μg/50μg/100μg/1mg
Recombinant Mouse IL-6 Protein 重组小鼠白介素-6	90146ES	2μg/10μg/50μg/100μg/500μg
Recombinant Human/Mouse/Rat TGF-beta 1/TGF-β1 Protein 重组人/小鼠/大鼠转化生长因子-β1	91701ES	2μg/10μg/100μg
Recombinant Human TGF-β2 Protein (CHO) 重组人转化生长因子-β2	91709ES	10μg/50μg/1mg
Recombinant Human TGF-beta 3 Protein 重组人转化生长因子-β3	91705ES	10μg/50μg/100μg
Recombinant Human IL-23 Protein 重组人白介素-23（液体）	90225ES	10μg/100μg/1mg
Recombinant Mouse IL-23 Protein 重组小鼠白介素-23	90226ES	10μg/50μg/100μg/1mg

参考文献：

1. McGeachy MJ, Cua DJ. Th17 Cell Differentiation: The Long and Winding Road. Immunity 2008; 28(4):445-453.

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