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无处不在的RNase污染

RNase（Ribonuclease，核糖核酸酶）是一类能够催化RNA降解为小分子RNA的核酸内切酶，主要切断核苷酸之间的磷酸二酯键，是生物的一种防御机制，相比于外源性的DNA，外源性的RNA侵入细胞后会参与转录和翻译，往往更加危险。所以几乎所有的生物都进化出了RNase，用来防御外源性RNA的入侵。因此，RNase广泛存在于真核、原核生物的所有细胞和组织中，除此之外，环境和许多生物材料都带有RNase，像实验用水与缓冲液、枪头与离心管、酶及其他相关试剂和耗材等；实验大环境的污染，如空气、灰尘和大多数物体的表面；实验人员的毛发、皮肤碎屑、汗液和唾液等。

RNase分子非常稳定，结构中存在二硫键，其活性不需要二价阳离子存在，因此RNase不容易变性，即使高温或使用变性剂后也容易发生复性。

RNase的无处不在，并且稳定性极强，耐热、耐酸、耐碱，使得RNA相关研究过程中，RNA样本中微量的RNase污染也足以让其完全降解，导致实验失败或影响RNA分析的结果。

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RNase抑制剂有效防止RNase污染

RNase分为内源性和外源性，其中内源性RNase在细胞破裂时可同时释放出来，因此消除内源性RNase的作用是RNA提取过程中非常关键的一个步骤。外源性RNase分布则非常广泛，空气、人的皮肤、头发和唾液、实验用水、耗材、原料酶等试剂中都存在RNase，是造成RNA容易降解的重要原因。因此，从源头上避免RNase污染十分必要，一方面要严格控制外源性RNase的污染，另一方面要最大限度地抑制内源性的RNase。

图1. RNase及抑制剂分类

常见的RNase抑制剂有焦碳酸二乙酯（DEPC）、异硫氰酸胍、氧钒核糖核苷复合物（RVC）和RNase的蛋白质抑制剂（RNasin）。其中，DEPC和异硫氰酸胍具有一定的毒性，RVC对PCR聚合酶有抑制作用，不利于展开后续的实验。RNase的蛋白质抑制剂能够特异地与RNase以非共价键结合形成复合体，造成RNase失活，因不具有毒性，不影响后续PCR实验等优势，常被用来减少RNase的污染。目前，RNasin主要用于cDNA合成，体外转录，体外翻译，以及mRNA-protein复合物分离纯化等过程中保护RNA不被降解，还可用于特定RNase活性的鉴定等。

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翌圣生物预防RNase污染的解决方案

翌圣生物以可溶形式在大肠杆菌中表达纯化的重组鼠源/猪源RNase抑制剂，能够广泛抑制各种类型RNase(RNase A, B, C)，并且该抑制剂不会抑制聚合酶的活性，如：TaqDNA聚合酶、AMV或M-MuLV反转录酶或噬菌体RNA聚合酶（SP6、T7或T3），已验证可广泛应用于RT-PCR/qPCR、RNA-seq、cDNA克隆和文库构建等多个应用场景。

此外，除了常规RNase抑制剂，翌圣生物还开发了经过UCF.ME®超低残留工艺处理，宿主残留更低，适合对背景菌要求更为严格的应用场景的RNase抑制剂，助力解决病原检测中的背景菌干扰，提高检测准确度。

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产品性能

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无核酸外切酶、切口酶及RNase残留

图2. Murine RNase Inhibitor核酸外切酶、切口酶残留及RNase残留检测

注：N代表阴性对照；1、2、3为3组平行实验。

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E.coli基因组DNA残留< 0.1 copies/100 U，显著低于常规版本

对不同批次的UCF.ME^® Murine RNase Inhibitor进行宿主（E.coli）基因组DNA残留检测，并与常规Murine RNase inhibitor的宿主残留水平对比，结果显示UCF.ME^® Murine RNase Inhibitor宿主基因组DNA残留低于0.1 copies/100 U，显著低于常规版本。

图3.UCF.ME^® MRI与常规版MRI中E.coli基因组残留检测结果对比

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8U/T投入量能有效抑制70ng RNase A

以Total RNA为模板，配制RT-qPCR反应体系，验证UCF.ME^® Murine RNase Inhibitor (Cat#14672ES)消化RNaseA能力，结果表明UCF.ME^® Murine RNase Inhibitor (Cat#14672ES)能有效抑制RNase A，且相较市面上同类产品抑制能力更有优势。

图4.UCF.ME^® Murine RNase Inhibitor (Cat#14672ES)对RNase抑制能力验证

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兼容NGS应用体系：建库产量及宿主DNA残留优于进口品牌

UCF.ME^® Swine RNase Inhibitor (Cat#14675ES)搭配翌圣全能型逆转录酶Hifair^® Ultra Reverse Transcriptase (200 U/μL) (Cat#14604ES)应用于RNA建库，建库产量高于进口品牌，测序数据质量相当且宿主DNA残留更低。

图5. 14675ES搭配14604ES应用于RNA-seq建库产量

图6. 14675ES搭配14604ES应用于RNA-seq测序质量

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产品选择

产品定位	产品名称	产品货号
鼠源RNase抑制剂	Murine RNase inhibitor (40 U/μL)	10603ES
	Murine RNase Inhibitor (200 U/µL)	10610ES
	Murine RNase Inhibitor (300 U/µL)	14671ES
低残留鼠源RNase抑制剂	UCF.ME® Murine RNase Inhibitor (40 U/μL)	14672ES
	UCF.ME® Murine RNase Inhibitor (200 U/μL)	14673ES
	UCF.ME® Murine RNase Inhibitor (300 U/μL)	14674ES
低残留猪源RNase抑制剂	UCF.ME® Swine RNase Inhibitor (40 U/μL)	14675ES
无甘油版RNase抑制剂	Murine RNase Inhibitor(40 U/µL,Glycerol-free)	10701ES
无甘油版RNase抑制剂	Murine RNase Inhibitor (200 U/μL, Glycerol-free)	10703ES

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