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Hifair® V Reverse Transcriptase 第五代耐热逆转录酶
产品货号:11300ES92
产品规格:10000 U
产品价格:¥1623.00
类别:逆转录酶

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  • 产品信息

    产品名称          

    产品编号

    规格

    价格(元)

    Hifair®  V Reverse Transcriptase 第五代耐热逆转录酶

    11300ES92

    10000   U

    1623.00  

    Hifair®  V Reverse Transcriptase 第五代耐热逆转录酶

    11300ES93

    50000   U

    5623.00  


    产品描述

    Hifair® V Reverse Transcriptase是在Hieff® M-MLV (H-) Reverse Transcriptase基础上通过基因工程技术得到的全新逆转录酶,与Hieff® M-MLV (H-) Reverse Transcriptase相比,其热稳定性大幅度提高,可耐受高达60℃的反应温度,适合具有复杂二级结构的RNA模板的逆转录。同时,该酶增强了与模板的亲和力,适合少量模板以及低拷贝基因的逆转录。Hifair® V Reverse Transcriptase合成全长cDNA的能力也有了提升,可扩增长达10 kbcDNA


    产品组分

    编号

    组分

    产品编号/规格

    11300ES92 (10000   U)

    11300ES93 (50000 U)

    11300-A

    Hifair® V Reverse Transcriptase (200 U/μL)

    50 μL

    250 μL

    11300-B

    5×Hifair® V   Buffer

    250 μL

    1.25 mL


    产品应用

    一步法RT-qPCR;基因克隆;荧光定量。


    活性定义

    以Poly(A) Oligo(dT)为模板-引物,在37℃,10 min内,将1 nmol的dTTP掺入为酸不溶性物质所需要的酶量定义为1个活性单位(U)。


    质量控制

    核酸外切酶残留检测:200 U本酶和1 μg λDNA-Hind Ⅲ37℃下孵育1 hDNA的电泳谱带不发生变化。

    核酸内切酶残留检测:200 U本酶和1 μg Supercoiled pBR322 DNA37℃下孵育1 hDNA的电泳谱带不发生变化。

    RNase残留检测:200 U本酶和1 μg小鼠肝脏总RNA37℃下孵育1 hRNA电泳谱带不发生变化。


    运输与保存方法

    冰袋运输。-20℃保存,有效期2年。


    注意事项

    1)请保持实验区域洁净;操作时需穿戴干净的手套、口罩;实验所用耗材均需保证RNase free,以防止RNase污染;

    2)所有操作均应在冰上进行,防止RNA降解;

    3)为保证高效率逆转录,建议使用高质量的RNA样本;

    4)为了您的安全和健康,请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

     

    第一链cDNA合成操作步骤

    1. RNA变性(此步为可选步骤,RNA变性有助于打开二级结构,可在很大程度上提高第一链cDNA的产量。)

    组分

    使用量

    RNase   free ddH2O

    to 13   μL

    Oligo   (dT)18 (50 μM)

    or   Random Primers (50 μM)

    or Gene   Specific Primers (2 μM)

    1 μL

    or 1   μL

    or 1   μL

    模板RNA

    Total   RNA: 1 ng -5 μg或mRNA:1 ng-500 ng

    65℃加热5 min,迅速置于冰上冷却2 min。简短离心收集反应液后,加入下表中的逆转录反应液,并轻轻吹打混匀。

    2. 逆转录反应体系配制(20 μL体系)

    组分

    使用量

    上一步的反应液

    13 μL

    5×Hifair®   V Buffer

    4 μL

    dNTP   Mix (10 mM)

    1 μL

    Hifair®  V Reverse Transcriptase (200 U/μL)

    1 μL

    RNase   inhibitor (40 U/µL)

    1 μL

    3. 逆转录程序设置

    温度

    时间

    25℃

    5 min

    42℃

    15-30  min

    85℃

    5 min

    【注】:1)当使用Random Primers时,需25℃,孵育5 min;若使用Oligo (dT)18Gene Specific Primers,此步可省略。

    2)逆转录温度:推荐使用42℃。对于高GC含量模板或者复杂二级结构的模板,可将逆转录温度提高至50-55℃

    385℃加热5 min,目的是使逆转录酶失活。

    逆转录产物可立即用于后续PCRqPCR反应,也可-20℃短期保存,若需长期保存,建议分装后,于-80℃保存,避免反复冻融。

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    HB200122