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400-6111-883
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400-6111-883
Hifair® Ⅲ Reverse Transcriptase 第三代耐热逆转录酶
产品货号:11111ES92
产品规格:​10000 U
产品价格:¥ 1426.00
类别:逆转录酶

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  • 产品信息

    产品名称

    产品编号

    规格

    价格(元)

    Hifair® Ⅲ Reverse Transcriptase 第三代耐热逆转录酶

    11111ES92

    10000 U

    1426.00

    Hifair® Ⅲ Reverse Transcriptase 第三代耐热逆转录酶

    11111ES93

    50000 U

    4626.00





    产品描述


    Hifair® Ⅲ Reverse Transcriptase是在Hifair® Ⅱ Reverse Transcriptase基础上通过基因工程技术得到的新一代逆转录酶,与Hifair® Ⅱ Reverse Transcriptase相比,其cDNA合成速度快,且热稳定性大幅度提高,可耐受高达60℃的反应温度,适合具有复杂二级结构的RNA模板的逆转录。同时,该酶增强了与模板的亲和力,非常适合少量模板以及低拷贝基因的逆转录。Hifair® Ⅲ Reverse Transcriptase合成全长cDNA的能力也有了提升,可扩增长达19.8 kb的cDNA。


    产品组分

    编号

    组分

    产品编号/规格

    11111ES92 (10000 U)

    11111ES93 (50000 U)

    11111-A

    5×Hifair® Ⅲ Buffer

    250 μL

    1250 μL

    11111-B

    Hifair® Ⅲ Reverse Transcriptase (200 U/μL)

    50 μL

    250 μL


    产品应用

    全长cDNA文库构建;终点法PCR;实时定量PCR等。


    活性定义

    以Poly(A) .Oligo(dT)为模板-引物,在37℃,10 min内,将1 nmol的dTTP掺入为酸不溶性物质所需要的酶量定义为1个活性单位(U)。


    运输与保存方法

    冰袋运输。-20℃保存,有效期1年。


    注意事项

    1)请保持实验区域洁净;操作时需穿戴干净的手套、口罩;实验所用耗材均需保证RNase free,以防止RNase污染;

    2)所有操作均应在冰上进行,防止RNA降解;

    3)为保证高效率逆转录,建议使用高质量的RNA样本;

    4)为了您的安全和健康,请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
    5)本产品仅作科研用途。

    第一链cDNA合成操作步骤

    1. RNA变性(此步为可选步骤,RNA变性有助于打开二级结构,可在很大程度上提高第一链cDNA的产量。)

    组分

    使用量

    RNase free H2O

    to 13 μL

    Oligo (dT)18 (50 μM)

    1 μL

    or Random Primers (50 μM)  

    or 1 μL

    or Gene Specific Primers (2 μM)

    or 1 μL

    模板RNA

    Total RNA: 10 pg -5 μg或mRNA:10 pg-500 ng

    65℃加热5 min,迅速置于冰上冷却2 min。简短离心收集反应液后加入下表中的逆转录反应液,并用移液器轻轻吹打混匀。

    2. 逆转录反应体系配制(20 μL体系)

    组分

    使用量

    上一步的反应液

    13 μL

    5×Hifair® Ⅲ Buffer

    4 μL

    dNTP Mix (10 mM)

    1 μL

    Hifair® Ⅲ Reverse Transcriptase (200 U/μL)

    1 μL

    RNase inhibitor (40 U/µL)

    1 μL

    3. 逆转录程序设置

    温度

    时间

    25℃

    5 min

    55℃

    15-30 min

    85℃

    5 min

    【注】1)当使用Random Primers时,需25℃,孵育5 min;若使用Oligo (dT)18或Gene Specific Primers,此步可省略;

    2)逆转录温度:推荐使用55℃;对于高GC含量模板或者复杂模板,可将逆转录温度提高到60℃;

    3) 可将逆转录时间延长到45-60min,有助于提高产量;

    4)85℃加热5 min,目的是使逆转录酶失活。

    ※ 逆转录产物可立即用于后续PCR或qPCR反应,也可-20℃短期保存,若需长期保存,建议分装后,于-80℃保存,避免反复冻融。


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