RCA产物如何验证？可以用什么方法分析？
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2026-09-17
RCA产物的验证可通过以下方法：
（1）限制性内切酶消化+琼脂糖凝胶电泳：在环状模板中设计单一切割位点，RCA产物经酶切后应产生均一长度的条带，可直观判断产物是否正确。这是最常用的验证方法。
（2）荧光染料检测：使用SYBR Green或PicoGreen等dsDNA荧光染料，在反应体系中直接检测荧光信号，可实时监测RCA进程。
（3）琼脂糖凝胶电泳直接上样：RCA产物可在琼脂糖凝胶中观察——高分子量产物的迁移位置靠近加样孔，呈现涂抹状或集中在孔口。
（4）Nanodrop/Qubit定量：定量测定DNA浓度，判断扩增产量。Qubit因使用荧光染料法，比Nanodrop的A260法更准确（不受核苷酸干扰）。
（5）测序验证：如有条件，可将RCA产物进行Sanger测序或NGS测序，验证产物序列的准确性。
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