qPCR与NGS，解码“抗肌萎缩蛋白”的缺失
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2026-09-30
肌营养不良症是一类严重的遗传性神经肌肉疾病，其中杜氏肌营养不良症（Duchenne Muscular Dystrophy，DMD）作为最常见且最严重的亚型，成为威胁儿童健康的“隐形杀手”。每3500名活产男婴中就有1名患病，患儿3-5岁便开始出现步态异常，肌肉逐渐萎缩，最终因呼吸或心力衰竭在20多岁离世，给无数家庭带来沉重的身心与经济负担。由于DMD尚无根治方法，早期精准检测、明确致病根源，成为延缓病情进展、开展遗传防控的关键。随着分子诊断技术的迭代升级，QPCR（实时荧光定量PCR）与NGS（下一代测序）两大核心技术强势突围，为DMD基因检测提供了更精准、高效的解决方案。
DMD是一种X连锁隐性遗传疾病，主要影响男性，女性多为携带者，少数女性可发病。其致病核心是X染色体上的DMD基因（抗肌萎缩蛋白基因）发生突变，该基因是人体最长基因之一，全长约2.2 Mb，编码3685个氨基酸的抗肌萎缩蛋白。该蛋白主要分布在骨骼肌和心肌，与其他蛋白形成肌营养不良蛋白糖蛋白复合体（DGC），维持肌细胞膜的完整性和稳定性。当DMD基因突变时，抗肌萎缩蛋白缺失，肌细胞膜结构受损，导致肌肉进行性损伤和萎缩，表现为进行性肌无力和运动功能障碍。
DMD的突变类型多样，包括大片段缺失、重复及微小突变，不同突变类型对应不同病情严重程度和预后，给临床检测、分型诊断及遗传咨询带来挑战。精准检测DMD基因不仅可明确致病突变类型，还能为家族遗传咨询、产前诊断提供依据，降低子代患病风险，并支持患者早期干预和个性化管理。
1. 多重连接探针扩增技术（MLPA）：目前DMD大片段缺失/重复检测的金标准，针对79个外显子设计特异性探针。
2. 荧光定量PCR（qPCR）：主要用于已知突变位点的快速筛查、家系验证以及拷贝数变异（CNV）的初步分析。
3. Sanger测序：针对较小的基因片段进行点突变检测，但难以覆盖整个DMD基因。
4. 二代测序（NGS）：通过靶向捕获或全外显子测序，一次性检测DMD基因的所有外显子区域的点突变和小片段插入缺失。
5. 三代测序/长读长测序：可跨越整个基因的结构变异区域，精准识别复杂的重排和深部内含子突变。
传统检测手段的不足
MLPA的局限：虽然MLPA是金标准，但它只能检测已知区域的缺失/重复，无法发现未知点突变或结构重排。且操作流程繁琐，对样本质量和实验操作要求极高，通量也相对较低。
Sanger测序的无力：DMD基因的79个外显子意味着需要进行上百次PCR反应和测序反应，耗时耗力且成本高昂。对于大片段缺失/重复，Sanger测序更是束手无策。
耗时长、效率低：传统方法需要逐步检测，流程复杂，检测周期长。
数据解读难：面对复杂突变类型时，传统方法难以提供完整、直观的结果支持。
qPCR和NGS的优势
为了应对DMD基因的复杂性，现代分子诊断正通过QPCR和NGS的有机结合，构建从快速筛查到全面覆盖的检测体系。
拷贝数变异（CNV）快速筛查：通过针对DMD基因79个外显子设计qPCR探针，可快速筛查大片段缺失或重复的区域。相比MLPA，qPCR流程更简便，检测周期更短，更适合大规模人群筛查或家系中已知突变的快速验证。
mRNA表达水平检测：DMD基因在肌肉组织中有一定表达，而在血液中表达极低或几乎不表达。RT-qPCR可用于检测患者肌肉组织或诱导多能干细胞分化后的肌细胞中DMD基因的转录水平，从而评估治疗效果或基因功能恢复情况。
携带者筛查：对于已知家系突变的女性携带者，qPCR可提供快速、准确的检测方案，帮助进行遗传咨询和生育指导。
一网打尽的突变检测：通过靶向捕获DMD基因全部外显子及其侧翼序列，NGS可一次性检测点突变、小片段插入或缺失。同时，结合拷贝数变异（CNV）分析算法，也可提示大片段缺失或重复，实现全基因范围的综合检测。
覆盖均一性提升：优化的捕获探针设计可显著改善高GC含量区域（如外显子1–11）的测序覆盖度，确保每个外显子都得到充分检测，降低漏检风险。
mRNA水平的功能验证：利用RNA-seq技术，可检测DMD基因的异常剪接事件、隐性外显子激活或阅读框移位等情况，为DMD与BMD的鉴别诊断提供直接证据，并辅助评估基因功能和治疗效果。
产品推荐指南
从传统检测的局限到分子技术的突破，DMD基因精准检测正迈向新高度。qPCR和NGS双技术并行，实现从点突变到大片段缺失/重复的全基因覆盖，快速、准确地获取患者遗传信息，为早期诊断、干预和家族遗传防控提供有力支持。翌圣生物提供的高品质酶原料，以高纯度、稳定性和可靠性保障检测过程，无论qPCR扩增还是NGS建库测序，都确保结果准确、可重复，为全流程精准检测提供坚实支撑，让DMD精准诊断不再只是可能，而成为可落地的解决方案。
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产品名称 |
产品编号 |
产品应用 |
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18504ES |
血液DNA提取 |
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18391ES |
组织DNA提取 |
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18605ES |
组织RNA提取 |
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Hieff Unicon® Universal Superfast qPCR Mix (One Tube) 四代快速、低残留、全预混qPCR预混液 |
16924ES |
qPCR检测 |
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Hifair® Universal Advanced Multiplex One Step RT-qPCR Mix (UDG Plus) 三代通用、高灵敏、耐抑制RT-qPCR预混液 |
16930ES |
RT-qPCR检测 |
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Hieff NGS® OnePot Pro DNA Library Prep Kit V3/ 兼容Illumina和MGI双平台酶切DNA建库试剂盒V3 |
12194ES |
酶切建库 |
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12629ES |
mRNA抓取 |
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Hieff NGS® EvoMax RNA Library Prep Kit（dUTP） 预混/预装板式RNA建库试剂盒 |
12340ES |
mRNA建库 |
