实验所用产品

产品货号	产品名称
40186ES	Ceturegel®基质胶(G FR/不含酚红/不含LDEV)(同康宁matrigel胶)

基质胶解冻：实验前，将Ceturegel®基质胶放置于装有碎冰的冰盒中，于4℃冰箱过夜解冻。

全程低温操作与铺板：所有步骤在冰上进行。使用预冷的枪头，取 200µL 融化的基质胶原液，加入预冷的24孔板孔底中央。用预冷枪头尖端小心抹匀摊开，注意避免接触孔壁。

预处理与固化：将铺有基质胶的24孔板置于 4℃冰箱中过夜，进行低温预处理。次日，取出孔板，转移至 37℃培养箱中固化1小时，使基质胶完全转变为固态凝胶。

细胞消化：取生长良好的HUVEC细胞，使用胰酶进行常规消化，用完全培养基终止消化后轻柔吹打成单细胞悬液。

细胞计数与重悬：对细胞悬液进行精确计数，并使用完全培养基将细胞浓度调整至 2×10⁵个/mL。

细胞接种：待基质胶固化完成后，小心吸弃孔内可能存在的液体。向每孔凝胶表面加入 500 µL 细胞悬液，即每孔接种细胞总数为 1.0×10⁵个（2×10⁵个/mL × 0.5 mL）。轻轻晃动孔板使细胞分布均匀。

孵育：将接种细胞的24孔板置于 37℃、5% CO₂ 恒温培养箱中培养。

动态观察：在培养后的 2小时、4小时和12小时，使用倒置显微镜（推荐4×或10×物镜）观察细胞形态变化。应详细记录细胞贴壁伸展、线性连接初步形成以及管状网络成熟（可能出现封闭环状结构）等不同阶段的表型。


图1：2h培养情况	图1：4h培养情况

（数据来源：甘肃中医药大学）

血管生成实验小贴士

细胞状态：推荐使用3-5代细胞，可进行血清饥饿同步化；

基质胶：全程冰上操作，铺胶轻柔均匀；
细胞接种：使用单细胞悬液，并精确计数，轻柔加样；

观察：建议通过预实验确定最佳观察时间点，以捕获网络成熟期。