Hieff NGS^® Ultima DNA Library Prep Kit for Illumina^®是针对Illumina^®高通量测序平台定向优化而成的新一代建库试剂盒。作为全新的升级版本，本产品采用高质量的酶学组成，简化的操作流程，可显著提高低质量样本文库转化率与扩增效率，具有广泛的样本适应性，同时兼容FFPE、cfDNA、ChIP DNA等样本，助力获得优异的测序数据。

• 适用500pg-1μgDNA样本。
• 兼容cfDNA、FFPE等低质量样本。
• 高效的文库转化率与扩增效率。
• 多样本验证可获得优异的文库与测序数据。
• 严格的批次性能与稳定性质控。

Ultima DNA 建库试剂盒用于 FFPE 样本建库（未分选）

-25~-15℃保存。

Q：12197与12199有什么区别？

A：12197建库起始量是100 pg-1 μg,12199建库起始量是500 pg-1 μg。

Q：建库试剂盒里面包含接头吗？

A：我们所有建库试剂盒都是不包含接头的，接头有设置单独的货号，可根据客户选择提供。

Q：接头连接之后可以直接进行分选吗？

A：不可以的，Ligation Enhancer 内含高浓度的PEG，会对分选造成显著影响，所以接头连接后如果进行

片段分选前必须先纯化。

Q：构建得到的文库产量偏低

A：（1）模板DNA 质量低，样本中含抑制物（抑制酶活性等）影响后续的反应效率，可以适当提高循环数或更换高质量模板；

（2）RNA 污染，样本中存在RNA污染会导致DNA定量不准确，使文库构建时DNA起始量不足；

（3）DNA起始量不足，可重新确定模板浓度是否准确。

（4）接头出现降解：接头存储不当会出现降解，影响连接效率。一般稀释过的接头可在室温放置 48h，判断接头是否降解的方法：

a. 用安捷伦 2100 毛细血管电泳检测，通过电泳条带大小判断；如果未发生降解，则条带大小大概为 62bp（complete adapter），如果发生降解，则无条带或条带很小。

b.用Qubit 酶标仪等检测仪器进行浓度测量，粗略判断接头是否降解。

检测方法：取 1uL，15uM 的complete 接头（12615ES-12618ES）若 Qubit 检测浓度 600ng/ul 左右，则

接头正常，反之若小于 600ng/ul，则接头可能降解成单链或小片段。酶标仪检测同理。

Q：文库电泳的时候条带异常：二聚体污染，小片段或大片段残留，文库大小偏大或偏小、宽峰、锯齿状峰形

A：（1）二聚体污染：包括接头二聚体（＜120bp）和引物二聚体（＜100bp），一般可用 12601 DNA 磁珠纯化后去除，接头二聚体明显过多的话可以降低接头用量。

（2）文库富集之后出现过多小片段和大片段：片段化条件不合适，文库磁珠分选比例不正确，PCR循环数太高。

（3）文库大小偏大或偏小：片段化条件或磁珠分选比例不合适，偏小的可能是过度片段化，。

（4）宽峰：a.分选体系问题，如因一轮分选方案中磁珠用量过少，可调整一下分选体系、增加或减少一轮分选中的磁珠体积,使主峰的位置在合格的上机文库范围内；b.样本DNA质量不好，发生降解，条带弥散。

（5）非正常的锯齿状峰形：a.Input DNA 量偏低，适当增加DNA起始量；b.样本片段化不完全，部分酶法片段化方式，可能造成锯齿状;c. PCR 扩增循环数过高，根据经验，当 cycle 大于 15 个循环时，可能造成非均一扩增，呈现文库锯齿状。

[1] Feng YL, Liu Q, Chen RD, et al. DNA nicks induce mutational signatures associated with BRCA1 deficiency. Nat Commun. 2022;13(1):4285. Published 2022 Jul 25. doi:10.1038/s41467-022-32011-x(IF:17.694)