细胞内蛋白流式细胞术protocol(甲醇方法)

2026-05-07

固定液： 含 4% 多聚甲醛的 1× PBS

透化液： 100%甲醇，使用前置于 -20℃ 预冷

抗体稀释液： 含 0.5% BSA的 1× PBS

细胞准备：

- 悬浮细胞： 250g 离心收集细胞。
- 贴壁细胞：吸去培养基，用 300 µL 1x PBS 快速洗涤细胞两次。然后用胰酶消化细胞，并通过轻柔吹打使其分散为单细胞悬液，最后离心收集。

1、吸去上清，向离心管中加入 100 µL 新鲜配制的固定液，用移液器将细胞沉淀吹散为单个细胞，以防止细胞间发生交联。

2、室温固定细胞 20 分钟。

3、加入 1 mL 1x PBS 洗涤细胞，250g 离心收集细胞。

4、将上清弃于生物危害废物容器中，用残留的溶液（约 20 µL）重悬细胞。

5、向细胞中逐滴加入 180 µL 预冷的透化液，同时轻轻晃动离心管以混合均匀。

6、冰上透化细胞 10 分钟。（若不立即使用，可将细胞保存于 -20℃）

7、加入 1 mL 1x PBS 洗涤细胞，250g 离心收集细胞。

8、将上清弃于生物危害废物容器中，加入 100 μL 按推荐稀释比例用抗体稀释液配制的一抗，重悬细胞。

9、室温孵育 1 小时，或 4℃ 孵育过夜。

10、加入 1 mL 1x PBS 洗涤细胞，250g 离心收集细胞。

11、弃去上清，加入 100 μL按推荐稀释比例用抗体稀释液配制的荧光标记二抗，重悬细胞。

12、室温避光孵育 30 分钟。

13、加入 1 mL 1x PBS 洗涤细胞，250g 离心收集细胞。

14、弃去上清，加入 200 µL 1x PBS 重悬细胞，即可上流式细胞仪分析。

人免疫细胞亚群流式抗体选购列表

亚群	抗原	产品货号	产品名称	产品规格
T Cell (T淋巴细胞)	CD3	32101ES	Purified Mouse Anti-Human CD3 mAb	100 μg/1 mg
		32102ES	FITC Mouse Anti-Human CD3 mAb	25 T/100 T
		32103ES	APC Mouse Anti-Human CD3 mAb	25 T/100 T
		32104ES	PE Mouse Anti-Human CD3 mAb	25 T/100 T
	CD4	32111ES	Purified Mouse Anti-Human CD4 mAb	100 μg/1 mg
		32112ES	FITC Mouse Anti-Human CD4 mAb	25 T/100 T
		32113ES	APC Mouse Anti-Human CD4 mAb	25 T/100 T
		32114ES	PE Mouse Anti-Human CD4 mAb	25 T/100 T
	CD8a	32121ES	Purified Mouse Anti-Human CD8a mAb	100 μg/1 mg
		32122ES	FITC Mouse Anti-Human CD8a mAb	25 T/100 T
		32123ES	APC Mouse Anti-Human CD8a mAb	25 T/100 T
		32124ES	PE-Cy5 Mouse Anti-Human CD8a mAb	25 T/100 T
	CD28	32131ES	Purified Mouse Anti-Human CD28 mAb	100 μg/1 mg
		32132ES	FITC Mouse Anti-Human CD28 mAb	25 T/100 T
		32133ES	APC Mouse Anti-Human CD28 mAb	25 T/100 T
		32134ES	PE Mouse Anti-Human CD28 mAb	25 T/100 T
B Cell (B淋巴细胞)	CD3	32101ES	Purified Mouse Anti-Human CD3 mAb	100 μg/1 mg
		32102ES	FITC Mouse Anti-Human CD3 mAb	25 T/100 T
		32103ES	APC Mouse Anti-Human CD3 mAb	25 T/100 T
		32104ES	PE Mouse Anti-Human CD3 mAb	25 T/100 T
	CD19	32141ES	Purified Mouse Anti-Human CD19 mAb	100 μg/1 mg
		32142ES	FITC Mouse Anti-Human CD19 mAb	25 T/100 T
		32143ES	APC Mouse Anti-Human CD19 mAb	25 T/100 T
		32144ES	PE-Cy5 Mouse Anti-Human CD19 mAb	25 T/100 T
	CD20	32151ES	Purified Mouse Anti-Human CD20 mAb	100 μg/1 mg
		32152ES	FITC Mouse Anti-Human CD20 mAb	25 T/100 T
		32153ES	APC Mouse Anti-Human CD20 mAb	25 T/100 T
		32124ES	PE Mouse Anti-Human CD20 mAb	25 T/100 T