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产品描述
过氧化物酶POD (EC 1.11.1.7)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，可催化过氧化氢氧化酚类和胺类化合物，具有消除过氧化氢和酚类、胺类毒性的双重作用。本试剂盒检测原理是：POD催化H2O2氧化成特定底物，在470 nm有特征光吸收。本试剂盒可以检测细胞或组织匀浆液上清、血清等多种生物样品中的POD活性。按照试剂盒提供使用步骤操作，1个试剂盒可供50次检测。
产品组分
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组分编号 |
组分名称 |
组分规格 |
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50106-A |
Extraction Buffer 提取液 |
60 mL×1 |
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50106-B |
Solution I 试剂一 |
60 mL×1 |
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50106-C |
Solution II 试剂二 |
0.33 mL×2 |
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50105-D |
Solution III 试剂三 |
10 mL×1 |
运输和保存方法
冰袋运输。 4 ℃保存，有效期6个月。
注意事项
1）待测样品不能含有酶抑制剂，同时避免反复冻融导致POD失活。
2）实验前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
3）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
4）本产品仅作科研用途！
需自备的仪器和用品
可见分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1 mL玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水
使用方法
1．样品制备
① 细胞或细菌样品
细菌或培养细胞：收集细菌或细胞到离心管中，500g 4℃离心5 min后弃上清；按照细菌或细胞数量(104)：提取液体积(mL)为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1 mL提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3 s，间隔10 s，重复30次）；8000g 4℃离心10 min，取上清，置冰上待测。
② 组织样品
按照组织质量(g)：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1 mL提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
【注】：对于质地坚硬的植物样本，可液氮研磨后再加入提取液，冰浴匀浆后离心取上清待测。
③ 血清（浆）样本：直接检测。
2. 测试步骤
① 分光光度计预热30 min以上，调节波长至470 nm，蒸馏水调零。
② 试剂二工作液的配制，实验时每瓶试剂二加入5 mL试剂一混匀备用，配制好的工作液可4 ℃保存一周，但建议尽量现配现用。
③ 测定前将试剂一、二和三在37℃（哺乳动物）或 25℃（其它物种）放置10 min。
④ 按操作表依次加入各试剂：
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试剂名称 |
测定管(μL) |
对照管(μL) |
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样本 |
15 |
0 |
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蒸馏水 |
270 |
285 |
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试剂一 |
520 |
520 |
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试剂二 |
130 |
130 |
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试剂三 |
135 |
135 |
在1 mL玻璃比色皿中按顺序加入上述试剂，立即混匀并计时，记录470 nm 下30s 时的吸光值A1和1min30s后的吸光值 A2，计算 ΔA=A2-A1。
【注】：1. 若一次性测定样本较多，可将试剂一、二、三和蒸馏水按比例配成混合液，在37℃（哺乳动物）或25℃（其
它物种）放置10 min以上，测定时加入15 µL样本和1055 µL混合液测定。2. 如果ΔA小于0.005，可将反应时间延长到 5min。如果ΔA大于0.5或者反应液中有较多气泡产生，可将样本用提取液稀释后测定，计算公式中乘以相应稀释倍数。
3. POD 活性计算
① 血清（浆）POD活性
单位定义：每mL血清（浆）在每mL反应体系中每分钟A470值变化0.01为一个酶活力单位。
计算公式：
POD (U/mL)= ΔA×V反总÷V样÷0.01÷T = 7133×ΔA
② 组织、细菌或细胞POD活性
a. 按样本蛋白浓度计算
单位定义：每mg组织蛋白在每mL反应体系中每分钟 A470值变化0.01为一个酶活力单位。
POD (U/mg prot) = ΔA×V反总÷(V样×Cpr)÷0.01÷T = 7133×ΔA÷Cpr
b. 按样本鲜重计算
单位定义：每g组织在每mL反应体系中每分钟A470值变化0.01为一个酶活力单位。
POD（U/g 鲜重）= ΔA×V反总÷(W×V样÷V样总)÷0.01÷T = 7133×ΔA÷W
c. 按细菌或细胞密度计算
单位定义：每1万个细菌或细胞在每mL反应体系中每分钟A470值变化0.01为一个酶活力单位。
POD (U/104 cell) = ΔA×V反总÷(500×V样÷V样总)÷0.01÷T = 14.27×ΔA
V反总：反应体系总体积，1.07 mL； V样：加入样本体积，0.015 mL；V样总：加入提取液体积，1 mL；T：反应时间，1 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细菌或细胞总数，500万。
HB220815
