Q:两款动物样本细胞核分离试剂盒(44011和44012)各自优势及如何选择?
A:44011为密梯法,适用范围广、背景干净。推荐单细胞相关应用。44012为过柱法,流程简单、快捷,兼容低起始量,细胞核得率高。推荐表观相关应用。
Q:两款试剂盒的适用样本类型及建议起始量?
A:适用于以哺乳动物为主的软组织(鱼类或禽类等样本推荐44011)。44011建议起始量20-50mg;44012建议起始量5-50mg。
Q:匀浆方法如何选择?
A:根据样本类型选择合适的匀浆方法。较松散的组织类型,如脾、正常脑组织等,建议使用塑料研磨杵进行手动研磨;有韧性的组织类型(如肺、肌肉等)及肿瘤组织,建议使用电动匀浆仪器(低档位)。不建议使用Dounce玻璃研磨器(细胞核易破裂)。
Q:如何确认合适的研磨程度?
A:匀浆后,肉眼观察,无明显大块组织残留;镜检观察大部分细胞核释放,细胞核无破裂。
Q:台盘蓝染色镜检时细胞核破裂,如何优化?
A:逐步镜检确认细胞核发生破裂的步骤。若研磨/裂解后细胞核破裂,可通过减少研磨次数/时间、缩短裂解时间、稀释裂解液等优化研磨/裂解步骤进行改善。若最终核镜检破裂,可通过稀释染料等方法降低台盘蓝浓度。
Q:44011试剂盒加完后密梯不分层。
A:加分离液2、分离液3时枪头伸至管底缓慢加液,加液形成密梯分层后不可搅动。
Q:44011试剂盒3000xg 离心后核层不明显,如何吸取核层?
A:细胞核位于分离液2、分离液3(各600 uL)交界处,吸取位置可参考0.5 mL刻度上方1-2mm处。