产品简介

 

Cebrary® Colorectal Growth Medium（Human）结直肠类器官生长培养基是一种无血清可应用于细胞或组织来源的结直肠类器官的建立和长期培养过程，在细胞外基质存在的条件下，培养基所含特有组分及丰富的细胞因子能促使结直肠细胞迅速生长成并形成结直肠类器官，类器官形成过程平稳且迅速，同时保持较高的结直肠细胞特性和活力，为后续基于结直肠类器官的生理功能、疾病研究和精准医学提供支持。

 

组分信息

 

组分编号	组分名称	41443ES60	41443ES76
41443 - A	Cebrary® Colorectal Growth Medium（Human） 结直肠类器官生长培养基	95 mL	475 mL
41443 - B	Nutritional components 1营养组分1	4 mL	20 mL
41443 - C	Nutritional components 2营养组分2	1 mL	5 mL

 

储存条件

 

41443 - A：2 ~ 8℃储存，有效期12月；

41443 - B：-80℃储存，有效期12月；

41443 - C：-80℃储存，有效期12月。

 

使用说明

 

使用前将41443 - B和41443 - C置于2℃ - 8℃冰箱2 - 3小时，待完全融化后，将41443 - B和41443 - C加入到组分A中，充分混匀，配制成完全培养基。建议完全培养基在1 - 3个月内使用完，41443 - B和41443 -C请勿反复冻融。

人源结直肠原代培养

1. 标本离体后，尽快取材。采用无菌器械，保证无菌环境，将肿瘤组织放入含有5 mL的原代组织保存液的15 mL离心管中，4℃转运。
2. 在生物安全柜中取出样品管，去除组织保存液，加入20 mL DPBS，摇晃清洗。更换DPBS，重复清洗至液体澄清。
3. 去除DPBS缓冲液后，将组织块移至10 cm含10 mL冷原代组织保存液的无菌培养皿中，用无菌眼科显微剪将组织剪碎（直径约0.5 mm - 1 mm）。
4. 将组织转移至50 mL离心管内，加入20 mL DPBS，重复清洗至液体澄清。
5. 收集组织碎片，加入组织消化液消化20 - 30 min，加入3倍体积的DPBS终止消化，并使用移液器或者无菌一次性吸管吹打悬液至无明显组织块。
6. 反复吹打后过70 μm筛网，收集结直肠细胞。
7. 向组织消化的离心管内再次加入20 mL DPBS，吹打后将细胞悬液再次经100 μm细胞筛网过滤至离心管内。
8. 4℃，300 g，离心5 min，弃去上清，保留细胞沉淀。
9. 向沉淀中加入1 mL DPBS混匀，取合适体积混合液至细胞计数仪计数计算总细胞数量及活率。
10. DPBS定容至5 mL。4℃，300 g，离心5 min，离心后弃上清。 
11. 使用预冷的完全培养基将基质胶稀释到70%。
12. 沉淀中加入稀释的基质胶，并调节至每微升基质胶含100 - 1000细胞/细胞团。
13. 吹打使类器官与基质胶混合，类器官基质胶混合液以50 μL/孔滴加至24孔培养板孔中心。
14. 37℃、5% CO₂培养箱中孵育10 - 15 min。
15. 孵育结束每孔加入500 μL结直肠类器官培养基。
16. 37℃、5% CO₂培养箱中继续培养，每2 - 3天更换一次新鲜培养基。
17. 类器官观察：每天观察类器官并拍照，了解初始类器官数量、增殖速度、形态、微生物污染情况等。

 

注意事项

 

1. 本产品仅作科研用途。

2. 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

3. 产品的分装、使用等操作需在无菌环境下进行。

 

 

Ver.CN20250415