产品简介 

本产品适用于从动物组织（肝脏、肾脏、脾脏等）中提取总RNA。采用独特的磁珠及精心优化的缓冲体系有效捕获释放的核酸，提取的核酸纯度高，质量稳定可靠，提取的核酸适用于RT-PCR、Northern Blot、体外翻译等实验。本产品配合自动化核酸提取仪器使用，可实现核酸的高通量提取。

 

产品信息

货号	18605ES20/18605ES50/18605ES60
规格	20T/50T/100T

 

组分信息

类别	组分编号	组分名称	规格
			18605ES20	18605ES50	18605ES60
Part Ⅰ	18605-A	裂解液	10 mL	25 mL	45 mL
	18605-B	洗涤液A	30 mL	70 mL	140 mL
	18605-C	洗涤液B	10 mL	24 mL	48 mL
	18605-D	洗脱液	1 mL x 2	5 mL	10 mL
	18605-E	磁珠悬浮液	0.4 mL	1 mL	1 mL x 2
Part Ⅱ	18605-F	DNase I	60 μL	150 μL	300 μL
	18605-G	DNase I Reaction Buffer (10×)	0.2 mL	0.5 mL	1 mL
	18605-H	PT液	90 μL	225 μL	450 μL

 

储存条件 

1. Part I组分室温运输，室温保存，有效期1年。
2.  Part II 组分冰袋运输，-20℃保存1年。
3. 收到货后，请检查Part I、Part II共2个组分是否齐全，并立即放入对应的保存温度中储存。

 

使用说明

1. 洗涤液B在使用前请按照标签说明加入对应无水乙醇。
2. 操作前请在裂解液中加入PT液至终浓度为1%，如1 mL中加入10 μL PT液，配制好的裂解液可在4℃保存一周。

 

样本前处理

5. 组织样本：在离心管中加入450 μL裂解液（确认已加入PT液），称取10-15 mg液氮研磨后的组织样本，涡旋混匀后室温静置5 min，得到样本裂解液。
5. 悬浮细胞样本：取不超过500万细胞样本，低速离心去除上清。在离心管中加入450 μL裂解液吹打混匀，室温静置5 min，得到样本裂解液。
5. 贴壁细胞样本：使用胰酶将贴壁细胞进行消化并低速离心去除上清，在离心管中加入450 μL裂解液吹打混匀，室温静置5 min，得到样本裂解液。若细胞量小于1×10⁶，可直接去除孔板内培养基，向其中加入450 μL裂解液吹打混匀，室温静置5 min，得到样本裂解液。

 

手动提取步骤

1. 在样本裂解液中加入350 μL异丙醇，涡旋5s混匀。
2. 加入20 μL磁珠悬浮液，涡旋5s混匀，置于室温旋转仪或涡旋仪混匀5 min。
3. 孵育结束后短暂离心，将离心管放置于磁力架上，直至磁珠完全吸附后，小心吸弃液体。
4. 向离心管中加入700 μL洗涤液A，充分涡旋混匀2 min，然后将离心管放置于磁力架上，直至磁珠完全吸附后，小心吸弃液体。
5. 向离心管中加入700 μL洗涤液B（请确认洗涤液B是否已添加无水乙醇），充分涡旋混匀2 min，然后将离心管放置于磁力架上，直至磁珠完全吸附后，小心吸弃液体。
6. 短暂离心弃去残留液体，室温晾干约3-5 min确保磁珠无乙醇残留，注意磁珠过度干燥将会导致核酸产量降低。
7. DNA酶消化液配制：

5. 常规样本，如肝脏，肾脏，脾脏和心脏等样本：10 μL 10 x buffer+3 μL DNaseⅠ+87 μL DEPC水，轻柔吹打混匀，配制完成后的消化液可短暂存放于4℃。
5. 微量样本，如微量脑组织：10 μL 10 x buffer + 0.3 μL DNaseⅠ+89.7 μL DEPC水，轻柔吹打混匀，配制完成后的消化液可短暂存放于4℃。

8. 向离心管中加入100 μL DNA酶消化液，短暂涡旋振荡使磁珠分散，室温放置15 min，期间每隔5 min涡旋混匀1次。
9. 向离心管中加入700 μL洗涤液B，充分涡旋混匀2 min，然后将离心管放置于磁力架上，直至磁珠完全吸附后，小心吸弃液体。
10. 向离心管中加入700 μL洗涤液B，充分涡旋混匀30s，然后将离心管放置于磁力架上，直至磁珠完全吸附后，小心吸弃液体。
11. 瞬离吸干净残留液体，室温晾干5 min。加入50-100 μL洗脱液，震荡混匀5 min。将离心管放置于磁力架上，直至磁珠完全吸附后，将洗脱液溶液转移至无RNA酶的离心管中，注意不要吸到磁珠。核酸溶液保存于-80℃。

注：如样本为微量样本，如提取总量小于5万的细胞样本，可选择在洗脱步骤进行65℃加热洗脱来增大核酸得率。

 

Ver.CN20240527