等温扩增技术(Isothermal Amplification)是一种在恒定温度下高效扩增特定核酸序列的分子生物学技术。与传统PCR技术相比,该技术无需热循环仪,仅需简单的恒温设备即可完成扩增反应,具有操作简便、反应快速、灵敏度高等显著优势,这些特性使其在即时诊断领域展现出巨大的应用潜力。在众多等温扩增技术中,LAMP(环介导等温扩增)技术因其高灵敏度和强特异性而成为主流选择。然而,该技术也存在明显局限:其依赖4-6条特异性引物和Bst DNA聚合酶的复杂反应体系,在实际应用中容易产生非特异性扩增,导致假阳性结果,严重制约了其在临床诊断中的应用可靠性。
最新研究表明,引入Tte UvrD Helicase可有效突破这一技术瓶颈。Tte UvrD Helicase源自嗜热菌Thermus thermophilus,热稳定性强,具有极强的DNA解旋能力,可高效解开双链DNA,适用于高复杂度模板的处理,显著降低LAMP实验中的非特异性扩增[1]。
图1. Tte UvrD解旋酶在HDA扩增技术中的原理图示意[2]
Tte UvrD Helicase在
LAMP反应中减少非特异扩增的原理
在LAMP反应中,高浓度引物(如FIP/BIP)容易形成引物二聚体或与非目标序列结合,导致非特异性扩增。Tte UvrD Helicase能够主动解旋双链DNA,包括由引物二聚体或非特异性退火形成的非目标结构,从而显著减少因引物错误配对或模板二级结构引起的假阳性扩增,提高LAMP反应的特异性。
在此,我们向您推介翌圣生物全新研发的Tte UvrD Helicase(Cat#14572),该产品能在60–75℃高温下保持高效活性,显著提升等温扩增技术的特异性和速度,避免非特异性扩增。该酶尤其适用于各种等温扩增技术,如解旋酶依赖扩增(HDA)、环介导等温扩增(LAMP)、重组酶聚合酶扩增(RPA)、滚环扩增(RCA)和链置换扩增(SDA)等。
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活动细则:
1、活动时间:即日起-5月31日;
2、活动名额有限,每位客户限一套。
性能展示
翌圣Tte UvrD Helicase(Cat#14572)
LAMP体系中能有效消除非特异性
分别使用两组LAMP引物配制LAMP反应体系,分别在每组体系中设置添加10 ng Tte UvrD Helicase实验组和未添加Tte UvrD Helicase对照组,结果显示翌圣Tte UvrD Helicase的引入能有效消除LAMP体系的非特异性扩增,且不影响阳性样本的检测。
无核酸外切酶、切口酶、RNase酶残留
将20 ng Tte UvrD Helicase分别与核酸底物孵育,并通过琼脂糖凝胶电泳分析谱带变化。实验结果表明,翌圣的3个批次Tte UvrD Helicase均未检测出核酸外切酶、切口酶或RNase 残留,为您的实验结果准确性与可靠性保驾护航。
图3. Tte UvrD Helicase核酸外切酶、切口酶、RNase残留检测结果
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参考文献:
[1] Bokelmann L, Nickel O, Maricic T, et al. Point-of-care bulk testing for SARS-CoV-2 by combining hybridization capture with improved colorimetric LAMP[J]. Nature Communications, 2021, 12(1): 1467.
[2] Barreda-García S, Miranda-Castro R, de-Los-Santos-Álvarez N, et al. Helicase-dependent isothermal amplification: a novel tool in the development of molecular-based analytical systems for rapid pathogen detection[J]. Analytical and bioanalytical chemistry, 2018, 410: 679-693.