细胞直接投入建库，无需核酸提取步骤，操作简单，兼容单B建库或者分子药筛建库。

Hieff NGS® Single Cell/Low Input cDNA Synthesis & Amplification Module可以对1~1000个细胞或者10 pg~10 ng的总RNA进行全长cDNA的合成。本模块是以Oligo (dT) Primer为引物，利用逆转录酶的末端转移酶活性即Template-switching活性在cDNA的3’端添加接头序列，PCR扩增以这个接头序列进行全长cDNA的合成，完成全长cDNA的富集。获得的全长cDNA扩增产物可以衔接Hieff NGS® Fast Tagment DNA Library Prep Kit for Illumina® (for 1 ng)（Cat.#13468）建库试剂盒，进行基因表达差异、可变剪接、融合基因等遗传调控信息分析。Hieff NGS® Single Cell/Low Input cDNA Synthesis & Amplification Module可以添加5 μL以内的样本体积。一般情况下，一个反应可以获得2- 20 ng的cDNA扩增产物。

• 样本投入量范围广：适用1-1000个细胞投入量或者10 pg-10 ng total RNA建库。
• 细胞投入建库，操作简单：直接投入细胞建库，无需核酸提取步骤。
• 兼容96孔板/384孔板细胞样本：样本可通过显微切割获取或者直接孔板细胞培养获取。
• 逆转录后，一链cDNA为DNA/RNA杂合链。
• 承接后续各品牌转座酶建库或者片段化酶的酶切法建库。

1. cDNA扩增产物检测

使用2100Agilent 2100 Bioanalyzer的High Sensitivity DNA Chip检测取1ul纯化后的cDNA扩增产物，1个293 T 细胞和10pg的293 Total RNA，同时扩增18个循环后，峰图分析如图，NTC是无模板阴性对照。

图 cDNA扩增产物检测

2. 测序数据分析

不同投入量的cDNA扩增后衔接Hieff NGS® Fast Tagment DNA Library Prep Kit for Illumina® (for 1 ng)（Cat.#13468）建库试剂盒测序数据分析如表分析：

表 不同投入量Total RNA的测序数据分析

-25 ~ -15°C保存。

Q:适用的细胞起始量和 RNA 投入量范围是多少？

A：1~1000 个细胞或者 10 pg~10 ng 的总RNA

Q：配的细胞裂解液，用完直接放-20℃，可以重复用吗？

A：不建议重复使用，最好现用现配。

Q：后续建库推荐搭配哪个建库试剂盒？

A：可搭配13468构建完整的单细胞转录组文库。