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10912ES引物设计原则?设计引物可否不引入酶切位点?退火温度如何选择(Tm 值如何算)?

10912ES引物设计原则?设计引物可否不引入酶切位点?退火温度如何选择(Tm 值如何算)?

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2026-08-24

a)设计原则:同源臂(15-25 bp,GC 含量 40-60%)+酶切位点(根据实验需求保留或删除)+基因特异性引物(常规插入片段扩增引物)。
b)可以不引入。
c)计算扩增引物退火温度时,只需计算基因特异性扩增序列的 Tm 值,引入的同源序列及酶切位点不应参与计算。

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