巨噬细胞清除小课堂 | 第十三课：淋巴结巨噬细胞清除

2026-10-28

淋巴结巨噬细胞是一类位于淋巴结组织中的免疫细胞，属于单核吞噬细胞系统的一部分。淋巴结巨噬细胞主要来源于两个途径：一是胚胎期卵黄囊和胎肝来源的驻留型巨噬细胞；二是出生后骨髓单核细胞经血液归巢分化补充。根据分布区域不同，主要有被膜下窦巨噬细胞（Subcapsular Sinus Macrophages, SSMs）、髓窦巨噬细胞（Medullary Sinus Macrophages, MSMs）及髓质和副皮质区巨噬细胞等亚群。

淋巴结巨噬细胞位于淋巴液引流的"门户"，持续过滤和摄取随淋巴液进入的病原体、颗粒性抗原、免疫复合物及凋亡细胞，并将抗原转运呈递给 B 细胞和 T 细胞，启动适应性免疫应答；同时通过清除自身抗原、调控生发中心反应参与免疫耐受与组织稳态。在疾病状态下，这类细胞可被肿瘤、感染或炎症信号重塑为免疫抑制或促炎表型，参与前哨淋巴结转移、慢性感染与自身免疫的发生发展；其强大的吞噬能力也使其成为纳米药物和纳米疫苗进入淋巴结的第一道屏障——通过脂质体包裹氯膦酸清除该类细胞，既有助于解析其在免疫激活与耐受中的具体功能，也能解除被膜下窦的摄取限制，显著提升疫苗与递送系统的淋巴结靶向效率。

文献一：

文章来源：Subcapsular sinus macrophages in lymph nodes clear lymph-borne viruses and present them to antiviral B cells (IF=56.1,Q1)

巨噬细胞清除方法：

实验前 7–10 天，小鼠后足垫皮下注射 30 μL Clodronate Liposomes（CLL）一次；氯膦酸盐由 Roche Diagnostics 提供，脂质体由磷脂酰胆碱（LIPOID E PC）+胆固醇制备。该剂量选择性清除引流淋巴结（腘窝、腹股沟、主动脉旁）的 CD169⁺ 巨噬细胞，远端淋巴结、脾脏巨噬细胞、LYVE-1⁺ 淋巴管内皮和 DC 均不受影响。

结果分享：

该补充图2结果表明，足垫注射氯膦酸脂质体（CLL）可特异性清除腘淋巴结内CD169⁺被膜下窦巨噬细胞，脾脏CD169⁺巨噬细胞、Lyve‑1⁺髓质淋巴管内皮细胞以及皮质区CD11c高表达树突状细胞均不受影响；流式与免疫组化结果证实该处理仅靶向耗竭目标巨噬细胞亚群，其余髓系细胞亚群比例无明显异常，电镜结果进一步验证处理后被膜下窦巨噬细胞完全缺失，证明该局部给药方案具备良好的细胞清除特异性，可用于研究CD169⁺被膜下窦巨噬细胞的功能。

文献二：

文章来源：CD169+ Subcapsular Macrophage Role in Antigen Adjuvant Activity (IF=7.0,Q1)

巨噬细胞清除方法：

通过调整剂量（6.5 mg/kg 低剂量、40 mg/kg 高剂量），向小鼠尾静脉注射氯膦酸盐脂质体（clodronate liposome），低剂量选择性清除淋巴结CD169⁺被膜下窦巨噬细胞，高剂量同时清除CD169⁺巨噬细胞与F4/80⁺巨噬细胞。使用对照脂质体来评估并消除脂质体本身带来的影响。在皮下免疫前1天完成注射，后续通过流式细胞术及淋巴结免疫组化检测巨噬细胞数量，以此确认不同剂量下巨噬细胞耗竭效率。

结果分享：

低剂量可特异性耗竭淋巴结CD169⁺被膜下窦巨噬细胞、保留F4/80⁺巨噬细胞，而高剂量会非特异性清除CD169⁺及F4/80⁺巨噬细胞；采用低剂量模型开展免疫功能实验，发现CD169⁺巨噬细胞清除后，PorB、CpG等TLR佐剂介导的抗原富集、FDC网络扩增、FDC 抗原沉积及特异性抗体应答显著受损，铝佐剂的免疫效应则受影响较小，同时结合 CD169敲除小鼠对比证实该部分功能依赖CD169⁺巨噬细胞细胞本体，而不单纯依赖CD169分子。

文献三：

文章来源：Central Role of CD169+ Lymph Node Resident Macrophages in the Adjuvanticity of the QS-21 Component of AS01 (IF=4.9,Q1)

巨噬细胞清除方法：

试用6~12周龄C57BL/6小鼠，对6~12周龄雌雄小鼠进行双侧后肢腓肠肌肌肉注射（i.m.），每侧肌肉给药体积20 μL；免疫体系含 4 μg乙肝表面抗原（HBs）或1 μg卵清蛋白（OVA），并搭配1 μg制剂化QS-21。为实现被膜下窦巨噬细胞（SCS巨噬细胞）耗竭，于免疫前6天注射氯膦酸脂质体或对照脂质体。

结果分享：

氯膦酸脂质体注射6天后，仅引流淋巴结的CD169⁺巨噬细胞被清除，其余固有免疫细胞群无明显变化。A）氯膦酸脂质体注射6天后，取引流淋巴结（髂淋巴结）与非引流淋巴结（颈淋巴结），使用DAPI（染细胞核，蓝色）和抗CD169抗体（红色）进行染色。B）氯膦酸脂质体（CL）注射第6天收集引流淋巴结（DLN），采用流式细胞术对单核细胞（Lin⁻CD11b⁺ Ly6C⁺ Ly6G⁻）、中性粒细胞（SSC高表达Lin⁻ CD11b⁺ Ly6C中等表达Ly6G⁺）以及树突状细胞（Lin⁻CD11c⁺ IA/IE高表达）进行定量检测（每组n=4~5）。

文献四：

文章来源：Infection-induced regulation of natural killer cells by macrophages and collagen at the lymph node subcapsular sinus (IF=7.7,Q1)

巨噬细胞清除方法：

小鼠于感染前 8–9 天，在耳片部位注射氯膦酸脂质体或PBS的脂质体混悬液。

结果分享：

脂质体包裹的氯膦酸经皮下注射，可在引流淋巴结中局部清除**CD169⁺被膜下窦巨噬细胞（CD169⁺CD11b⁺CD11c低/中Ly6C低/中**以及**CD169⁺Ly6C高炎症巨噬细胞（CD169⁺CD11b高CD11c低/中Ly6C高）**（图 6A）。值得注意的是，CD169阳性细胞亚群的清除效果，远强于单纯CD11b⁺CD11c低/中Ly6C低/中群体、或是CD11b⁺CD11c 低/中Ly6C高群体的清除效果。与之类似，CD11c高细胞的占比没有明显变化，但 CD169⁺CD11c 高细胞占比出现小幅下降（图6A）。这种对CD169阳性细胞的优先清除效应，可能是因为脂质体经淋巴管转运，从而选择性清除淋巴结被膜下区域的髓系细胞。氯膦酸脂质体处理不会改变NK细胞总占比，也不会改变感染程度，但表达CD69与IFN‑γ的 NK细胞比例显著降低（图6B‑C）。

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