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400-6111-883
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UCF.ME® T7 RNA Polymerase GMP-grade(1 KU/μL)
产品货号:10613ES92
产品规格:10 KU
产品价格:¥ 1955
类别:RNA合成

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  • 产品信息

     

    产品名称

    产品编号

    规格

    价格(元)

    UCF.ME®T7 RNA Polymerase GMP-grade(1 KU/μL)

    10613ES92

    10 KU

    1955

    10613ES97

    50 KU

    8655

    10613ES98

    500 KU

    74855

    10613ES99

    5000 KU

    询价

     

    产品描述

     

    本产品是大肠杆菌重组表达来源的噬菌体T7 RNA聚合酶,以含有T7启动子序列(5’-TAATACGACT CACTATAG*-3’)的双链DNA为模板,以NTP为底物,合成与启动子下游的反向单链DNA互补的RNA。双链线性平末端或5’突出末端DNA均可作为T7 RNA聚合酶的底物模板,因此线性质粒、PCR产物均可用作体外合成RNA的模板。

    注:G*RNA转录的第一个碱基。

    本品是按照GMP工艺要求生产,产品以无菌液体形式提供。 

     

    产品性质

     

    来源(Source)

    重组E. coli

    最适温度(Optimum Temperature)

    37℃

    宿主核酸残留Host nucleic acid residue

    <10 fg/U

    宿主蛋白残留Host protein residue

    <50 ppm

    病原体(HBV/ HCV/HIV)检测

    无检出

    RNA酶残留(RNase residue

    阴性

    内毒素残留Endotoxin residue

    <0.05EU/1000U

    支原体检测Mycoplasma detection

    无检出

    无菌检测Sterility testing

    无检出

    储存缓冲液(Storage Buffer)

    50 mM Tris-HCl, 1 mM EDTA, 10 mM DTT, 100 mM NaCl, 0.1% Triton X-100,50%v/v)甘油pH7.9@25℃

    活性单位定义(Unit Definition)

    在 37℃、pH8.0 的条件下,1 h内使 1 nmol 的 [3H] GMP 掺入酸不溶性沉淀物所需要的酶量定义为1个活性单位。

    注:具体产品质检数据及更多指标请查看批次质检报告

     

    产品组分

     

    编号

    组分

    产品编号/规格

    10613ES92

    (10 KU)

    10613ES97

    (50 KU)

    10613ES98

    (500 KU)

    10613ES99

    (5000 KU)

    10613-A

    T7 RNA polymerase (1 KU/μL)

    10 μL

    50 μL

    500 μL

    5 mL

    10613-B

    10×Transcription Buffer

    100 μL

    500 μL

    1 mL×5

    10 mL×5

    注:10×Transcription Buffer中含60 mM MgCl2100 mM DTT,但不含有NTP,如需请购买本公司NTP set solution 10133

     

    产品应用

     

    1. 单链 RNA合成(包括mRNA,siRNA,gRNA等各类RNA前体,以及同位素标记或非同位素标记的RNA探针)

    2. 以(Cap analog)为引物合成Capped mRNA

     

    运输和保存方法

     

    干冰运输。-20℃保存,有效期一年。

     

    应用实例

     

    1、按下列体系配制反应体系

    组分

    体积(μL)

    终浓度

    10×Transcription Buffer (Mg2+ Plus)

    2

    CTP/GTP/ATP/UTP (100 mM each)

    0.4 each

    2 mM each

    T7 RNA Polymerase (1 KU/μL)

    0.5-1

    -

    RNase inhibitor (40 U/μL)

    1

    -

    RNase free H2O

    Up to 18

    -

    模板DNA

    2 (100 ng-1μg)

    -

    . DNA模板需要最后加入。由于10×Buffer中含有亚精胺,亚精胺浓度过高会引起DNA模板沉淀。

    . Buffer和水建议放置到室温,然后开始使用,反应于室温下配制,防止温度低引起亚精胺沉淀高浓度DNA模板。

    .若转录长度< 100 nt,模板投入量可增加至2 μg。

    . RNase inhibitor (40 U/μL)请购买本公司产品10603。

    .为了特定区域的有效转录,建议在其区域下游把模板DNA预先切成平端或5′突出末端。

    237℃反应1-2 h(若转录长度≤ 100 nt,增加时间至4-8 h)。

    3、反应结束后,使用2 U DNaseⅠ(无RNase)37℃15 min去除DNA模板。

    4、转录产物纯化体外转录产物可选用RNA Cleaner磁珠进行纯化(12602),以去除蛋白、盐离子和其他杂质。也可以采用酚/氯仿纯化法(具体操作步骤可联系Yeasen索取)。

     

    注意事项

     

    1DNA模板的种类:推荐使用含T7启动子的线性化质粒和PCR产物作为模板。

    2、转录模板的纯度会显著影响体外转录反应。在质粒DNA抽提过程中残留的RNase A会显著影响转录RNA的质量。通过酚-氯仿抽提的质粒DNA为最佳模板;PCR产物建议采用胶回收纯化后使用。

    3、20 μL反应体系中加入0.02 U热稳定无机焦磷酸酶可显著提高转录产量。

    4为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

     



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    1021