使用前，正钒酸钠需要先被充分活化（去聚合）以获得最大的磷酸酶抑制活性，步骤如下：
1）正钒酸钠溶于水配制 200 mM 的溶液，称取适量正钒酸钠粉末溶于纯水中。
2）用 1N NaOH 或 1N HCl 调整 pH 至 10.0。正钒酸钠起始溶液的 pH 值依批次变化而有差异。pH 10.0 溶液呈现黄色。
3）加热煮沸，直至溶液变为无色（大概煮 10 min），所有的结晶必须充分溶解。
4）冷却至室温。
5）重新调整pH 至 10.0，并重复步骤 3）4）直至溶液保持无色且 pH 稳定在 10.0。
6）将活化的正钒酸钠溶液分装成小份（如 1 ml），-20 °C 保存。储存液可直接加入细胞或组织裂解液，稀释到工作液如 1 mM。细胞培养实验需要先用 0.2 um 滤膜过滤除菌后，稀释加入培养基内；
7）从-20 °C 取出分装小样融化后，需加热溶液约至 90~100 °C，漩涡混匀，充分溶解结晶。