从质粒上酶切的产物可直接连接Topo载体吗？为什么？
从质粒上酶切的产物可直接连接Topo载体吗？为什么？
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2026-08-24
不可以。Topo载体进行连接反应的时候需要5'羟基端和Topo酶发生反应。PCR产物5'羟基端没有磷酸化，可以直接进行TOPO克隆。但是，酶切产物5'端为磷酸化状态，可以直接进行TA克隆的，但是不能进行Topo克隆。如果需要，可以用小牛肠碱性磷酸酶（10321ES）进行去磷酸化处理后连接Topo载体。
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