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产品名称: Hieff NGS™ mRNA Isolation Master Kit
  • 产品货号:12603ES24
  • 产品规格:24T
  • 产品价格:
  • 类别:磁珠与建库模块
   
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  • 产品信息

    产品名称

    产品编号

    规格

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    价格(元)

    Hieff NGSTM mRNA Isolation Master Kit

    12603ES24

    24 T

    2-8℃保存

    616.00

    Hieff NGSTM mRNA Isolation Master Kit

    12603ES96

    96 T

    2-8℃保存

    2266.00

    产品描述

    Hieff NGSTM mRNA Isolation Master Kit是翊圣生物自主研发的专门用于纯化mRNA的磁珠试剂盒。其中的mRNA Capture beads为偶联了OligodT)的微米级顺磁性微球,通过与带有polyA)尾巴的mRNA相结合,将mRNA0.1-4 μg完整度良好的总RNA进行分离纯化。

    产品组分
    组分名称
    12603ES24
    12603ES96
    1
    mRNA Capture Beads
    1.2 mL
    4.8 mL
    2
    Bead Binding Buffer
    1.2 mL
    4.8 mL
    3
    Beads Wash Buffer
    15 mL
    60 mL
    4
    Tris Buffer
    1.2 mL
    4.8 mL
    5
    Nuclease-free water
    1 mL
    4 mL
    运输与保存方法

    冰袋运输。2-8℃存,效期一年。避免冷冻!

    使用方法

    自备材料

    磁力架,Nuclease-free离心管。

    二、操作流程

     

    1 mRNA纯化试剂盒操作流程

     

    一、 操作步骤

    3.1 实验前准备

    mRNA Capture Beads4℃取出,静置使其温度平衡至室温(约30 min)。

    3.2 样本准备

    在一个Nuclease-free PCR管中,用Nuclease-free water0.1-4 μgRNA稀释至50 μL,冰上放置备用。

    3.3 mRNA与磁珠的结合

    颠倒或涡旋振荡混匀磁珠,吸取50 μL磁珠悬液加入50 μL RNA样品中,用移液器反复吹打6次,

    使其充分混匀。

    将磁珠与RNA的混合物置于PCR仪中,65℃5 min4℃hold使得RNA变性。

    室温孵育5 min,使mRNA与磁珠完全结合。

    将样品置于磁力架中,室温静置5 min,使mRNA与总RNA分离,小心移除上清。

    3.4 样本的洗涤

    将样品从磁力架上取出,加入200 μL Beads Wash Buffer用移液器反复吹打6次以彻底混匀

    ② 将样品置于磁力架中,室温静置5 min,小心移除上清。

    重复上一步骤,共洗涤两次。

    3.5 mRNA样本第一轮洗脱

    将样品从磁力架上取出,加入50 μL Tris Buffer重悬磁珠,用移液器反复吹打6次以彻底混匀。

    将样品放置于PCR仪中,80℃2 min25℃holdmRNA洗脱下来。

    3.6 mRNA与磁珠的再次结合

    加入50 μL Beads Binding Buffer,用移液器反复吹打6次以彻底混匀。

    室温孵育5 min,使mRNA结合到磁珠上。

    将样品置于磁力架中,室温静置5 min,小心移除上清。

    3.7 样本的洗涤

    将样品从磁力架上取出,加入Beads Wash Buffer用移液器反复吹打6次彻底混匀,将样品重新放回至磁力架中室温静置5 min,然后吸除全部上清。

    【注】最后需要用10 μL移液器吸干净残留液体。

    3.8 mRNA样本终洗脱

    方案一:用于逆转录反应。

    将样品从磁力架上取出,加入12 μLNuclease-free water重悬磁珠,用移液器吹打6次以彻底混匀将样品置于PCR仪中80℃2 min后,立即置于磁力架上室温静置5 min待溶液澄清后,小心吸取10 μL上清至另一新的Nuclease-free PCR管中。

    方案二:用于RNA文库的构建。

    可根据相关试剂盒说明书加入相应体积的Frag/Primer Buffer,进行文库构建。

    【注】:样品可置于冰上继续进行NGS文库构建或其他分析应用(建议立即进行后续反应),也可以置于-80℃保存。

    注意事项

    1)磁珠使用前务必要回温至室温,并充分混匀,否则可能影响样品的回收效率。

    2)操作过程要严格保证无RNase酶和核酸污染。

    3本产品和其他试剂配套使用时,请按照具体实验说明来进行操作。

    4)想要获得好的纯化效果,需要有完整度良好的总RNA,确保RIN值在7.0及以上。

    5)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作