您好,欢迎来到上海翊圣生物科技有限公司官方网站!
400-6111-883
| EN
400-6111-883
Yefluor 594 EdU Cell Tracking Kit Yefluor 594 EdU细胞标记示踪试剂盒
产品货号:40290ES60
产品规格:100 T
产品价格:¥3483.00
类别:EDU检测系列

说明书下载

  • 产品信息

    产品名称

    产品编号

    规格

    储存

    价格

    Yefluor 594 EdU Cell Tracking Kit

    Yefluor 594 EdU细胞标记示踪试剂盒

    40290ES60

    100 T

    -20℃避光保存

    3483.00


    产品描述

    EdU(5-溴-2-脱氧尿嘧啶)是一种嘧啶类似物,能在DNA复制时期代替胸腺嘧啶(T)渗入正在合成的DNA分子中。经孵育EdU将进入所有的细胞中从而达到标记细胞的目的。将被EDU标记的细胞注入动物体内,经培养后切片、染色,即可观察EdU标记细胞的分布、分化和形态变化,适用于各种细胞,各种动物模型的标记示踪实验,在肿瘤生物学、分子生物学、遗传学、药物代谢动力学等研究中广泛应用。 

    光谱特性: Yefluor 594 Azide:Ex/Em=594/617 nm;Hoechst 33342:Ex/Em=350/461 nm,bound to DNA


    产品组分

    编号

    组分名称

    产品编号/规格

    40290ES60(100T)

    保存条件

    40290-A

    EdU

    2 mg

    -20℃

    40290-B

    Yefluor 594 Azide

    20 μL

    -20℃,避光

    40290-C

    10× Click-iT EdU 反应缓冲液

    1 mL

    2-8℃

    40290-D

    CuSO4

    0.5 mL

    2-8℃

    40290-E

    Click-iT EdU 缓冲液添加物

    30 mg

    2-8℃

    40290-F

    Hoechst 33342

    25 μL

    2-8℃


    运输与保存方法

    冰袋(wet ice)运输。-20℃避光保存,有效期1年。


    注意事项

    操作时请采取防护措施,穿防护服、戴一次性手套等。


    使用方法

    1.EdU标记
    1.1 按每孔1-5×105细胞接种于6孔板中,培养至正常生长阶段。(可选)客户可以根据实验需要进行各种药物处理。 

    1.2 制备10 mM EdU储液 如2 mg EdU(组分A) 溶于800 μL无水DMSO即可。

    用细胞培养基按比例稀释EdU储液,制备适量10 μM EdU培养基,EdU的标记浓度应根据所用的细胞类型做相应的优化选择。 

    注:1) 由于需要标记一个细胞周期,属于长时间孵育(>24 h)宜采用低浓度(1~10 μM);

     2) 如果需配置更小浓度的EdU培养基,按相应比例稀释即可; 

    3) 配置好的培养基的保存时间取决于培养基的性质。

    1.3 每孔加入500 μL 10 μM EdU培养基孵育一个细胞周期,弃培养基; 

    注:1) 孵育时间基本上等于该细胞的细胞周期,最大限度使所有细胞都标记EdU;

          2) EdU培养基用量以没过细胞为宜,但需保证EdU孵育时间内的营养物质供给。 

    1.4 将一个孔的细胞进行细胞标记率检测,检测方法请参考荧光显微镜细胞增殖检测。 


    2. 细胞移植

    2.1 取适量细胞PBS清洗后,进行移植,移植方式依据实验目的而定;

    2.2 移植完成后,按照实验条件继续培养;

    2.3 取目的组织切片,切片类型依据客户需求而定。


    3. 切片处理

    3.1 切片前处理:动物器官最好进行洗涤以去除组织或器官中残留的EdU,降低背景;

    3.2 切片厚度:3~10 μm为宜,切片过厚可能影响切片背景;

    3.3 切片后处理:

    1)石蜡切片脱蜡:二甲苯洗脱3次,10 min/次,乙醇梯度(100%,95%,85%,75%)洗脱各1次,水洗脱1次;

    2)冰冻切片处理:室温放置30 min后,4℃丙酮固定10 min,PBS清洗3次,每次5 min。

    3.4  2 mg/mL甘氨酸清洗10 min;

    3.5 (加强)加入100 μL渗透剂(0.5% Triton X-100的PBS)脱色摇床孵育10 min;PBS清洗10 min。


    4. EdU检测

    注意:本参考步骤每个切片使用100 µL的Click-iT反应混合物。用户可根据自己的样本情况调整等比例减少所用的溶液体积。

    4.1 准备1× Click-iT EdU 反应缓冲液(组分C):10× 组分C试剂以去离子水稀释10倍即可。

    4.2 制备一份5× 的Click-iT EdU反应添加物储液(组分E):加0.3 mL去离子水至30 mg的E组分试管中(100 mg/mL),混匀至全部溶解。使用后,剩余储液存放在≤-20℃,可保存一年,溶液一旦呈现棕色,则说明有效成分降解不能再用(注意:不同规格的组分E均按照此比例加去离子水溶解为5×储液备用)。

    4.3 准备1× Click-iT EdU缓冲液添加物:以去离子水稀释5×储液(组分E)至1×,溶液应新鲜配置,当天用完。

    4.4 依据表1 准备Click-iT反应混合物。表1要求添加的组分对于反应来说非常重要,否则反应无法有效进行。

    表1  Click-iT反应混合物

    反应组分

    以10个孔的样本数为例

    1× Click-iT EdU 反应缓冲液(组分C)

    860 µL

    CuSO4 (组分D)

    40 µL

    Yefluor 594 Azide(组分B)

    2 µL

    1×反应缓冲液添加物(步骤4.3所准备)

    100 µL

    总体积

    1 mL

    4.5 去除促渗剂,以每孔0.1 mL的3% BSA in PBS的洗涤液洗涤2次,去除洗涤液。

    4.6 加入0.1 mL Click-iT反应混合物至每个切片,使反应液均匀覆盖样本。

    4.7 室温避光孵育30 min