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新冠病毒假病毒(SARS-CoV-2 pseudovirus)

—— 新冠研究及新冠产品开发利器


概述


自2019年末SARS-CoV-2大流行开始,针对新冠病毒的检测和治疗研究一刻不曾停歇。但是由于新冠病毒具有较高的危险性,研究条件苛刻。因此,使用新冠假病毒进行研究和产品开发已经成为了新冠检测、新冠疫苗及药物研发中的关键评价手段。

假病毒简介


假病毒是一种重组病毒,它的基因通常被改变或修饰,以消除其本身表面蛋白的表达,用另一个质粒表达替代性表面蛋白,可以感染易感宿主细胞,但只能在细胞内复制一轮。由于病毒表面蛋白在进入宿主细胞中起着关键作用,因此假病毒表面蛋白的构象结构与天然病毒蛋白具有高度相似性;然而,与野生型(WT)病毒相比,假病毒的毒力有所减弱,使它们能够在P2实验室中安全处理。

SARS-CoV-2是一种正链RNA病毒,研究表明,SARS-CoV-2和SARS-CoV都利用血管紧张素转换酶2(ACE2)作为宿主细胞表面受体进入靶细胞。SARS-CoV-2基因组的前三分之二名为ORF1ab区,其余部分则编码几种辅助蛋白和四种结构蛋白,包括棘突(S)糖蛋白、包膜(E)、基质(M)和核衣壳(N)蛋白,它们对维持包膜SARS-CoV-2病毒粒子的结构完整性很重要。将慢病毒载体中的包膜糖蛋白用新冠病毒 S 蛋白替代,可形成模拟新冠病毒感染的假病毒。假病毒通过表面 S 蛋白感染靶细胞并表达报告荧光素酶基因。中和抗体可以阻断 S 蛋白和ACE2 的结合,从而阻止假病毒对宿主细胞的感染【1】。通过检测报告基因荧光素酶的表达量,能推断出病毒被阻断的程度,从而进行中和剂的筛选或验证。因此假病毒在作为病毒核酸检测试剂盒验证阳性对照和标准品,中和抗体研究和疫苗开发,病毒受体研究中代替真病毒进行细胞水平检测的首选。

翌圣生物科技(上海)股份有限公司(以下简称“翌圣生物”)病毒平台经过科研攻关,依托慢病毒载体开发出了满足不同研究和开发目的的假病毒相关产品,助力各领域病毒研究和产品开发。

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利用慢病毒包装体系构建新冠假病毒流程

 

新冠S蛋白(Spike protein)假病毒


自新冠爆发以来,作为阻止病毒扩散和感染最有效的手段之一就是疫苗。在注射疫苗之后能够刺激人体免疫系统产生相应的抗体抵抗真病毒的入侵。其中用于评估疫苗效果,以及评价临床试验和大规模接种后疫苗的金标准就是中和抗体(Neutralizing Antibody)检测。但是利用真病毒进行中和抗体检测成本高,危险性大,检测困难。翌圣生物基于慢病毒系统开发的新冠S蛋白假病毒,病毒表面含有新冠病毒的刺突糖蛋白(S蛋白,Spike protein),病毒内含有GFP及Luciferase报告基因,方便检测。

 

3.1产品特点:

(1) 表面含有新冠S蛋白,模拟新冠侵入过程

(2) GFP及Luciferase双报告系统,方便检测

(3) 无自主复制能力,安全性高

(4) 每批次质检,滴度≥1×106 TU/mL


3.2 产品数据:

(1) 病毒感染测试:

GFP荧光检测

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10*10-3ml假病毒液                       10*10-7ml假病毒液

(96孔板HEK293T-ACE2细胞铺板感染病毒48小时后检测)

 

Luciferase荧光强度测定:

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SARS-CoV-2 Spike蛋白假病毒侵染HEK293T-ACE2测定Luciferase的读值

 

(2) 中和抗体效果评价:

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SARS-CoV-2 Spike蛋白假病毒用于中和抗体效果的评价

 

此外,翌圣生物还能提供过表达ACE2的HEK 293T细胞株,以及定制化病毒核酸检测用假病毒,从而更好的助力您的中和抗体研究,欢迎咨询。

 

FAQ


Q1:11900病毒的滴度是怎么计算的?

A:本产品是通过提取病毒核酸之后通过qPCR的方法和质粒拷贝的标准品对比进行计算的,一般是1×108/mL以上。

Q2:11900ES 三个基因序列的选择依据是什么?

A:根据国家计量院提供的信息,3个基因是涵盖已公布的新冠病毒3个主要基因:核壳蛋白N基因全长、包膜蛋白E基因全长、开放阅读框1ab (ORF1ab)基因片段。

Q3:假病毒的质量稳定吗?

A:每批次假病毒都会做质检分析,因为假病毒制作的工艺比较成熟,因此每批次的数据波动不大,都在要求范围内。

Q4:S蛋白假病毒的滴度是怎么计算的?

A:本产品是通过感染细胞检测荧光计算感染细胞数进行计算,1个荧光细胞=1活性病毒颗粒。

Q5: S蛋白假病毒和11900有什么区别?

A:S蛋白假病毒是病毒外壳表达有新冠病毒刺突蛋白,核酸为报告基因的假病毒,11900假病毒病毒外壳是VSV-G,核酸是新冠核酸的部分基因序列。

Q6:S蛋白假病毒的核酸是新冠病毒的核酸序列吗?

A:本产品只有包膜蛋白是新冠的刺突蛋白,核酸序列是GFP和Luciferase标签蛋白的序列。

Q7:你们都有什么毒株的假病毒?

A:目前有野生型,α,β,γ,λ,δ和Omicron突变株的假病毒,以及多种S蛋白点突变的假病毒。

Q8:过表达ACE2蛋白HEK293T细胞系是怎么筛选的?

A:通过慢病毒转染筛选的稳定细胞株,带有嘌呤霉素的抗性基因。

 

订购信息


产品名称

产品编号

规格

价格(元)

促销价(元)

备注

COVID-19-pseudovirus(2019-nCOV假病毒)

11900ES03

1 mL

1552

1200


11900ES08

5×1 mL

6752

5800


11900ES10

10×1 mL

12352

11000


COVID-19-Spike Protein Spseudovirus (2019-nCOV-S蛋白假病毒)

11906ES50

50 μL

4552

/


11906ES70

4×50 μL

14452

/


11906ES80

20×50 μL

65752

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COVID-19-Spike Protein Pseudovirus Beta (β) strain(COVID-19-S蛋白假病毒Beta (β) 株)

11907ES50

50 μL

5455

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我司还可以提供新冠α株,λ株,δ株,γ株突变假病毒
 

11907ES70

4×50 μL

17285

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11907ES80

20×50 μL

75655

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COVID-19-Spike Protein Pseudovirus Omicron strain( COVID-19-S蛋白假病毒Omicron株)

11991ES50

50 μL

5455

/


11991ES70

4×50 μL

17285

/


11991ES80

20×50 μL

75655

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COVID-19-Spike (R408I) Protein Pseudovirus COVID-19-S蛋白(R408I)假病毒*

11992ES50

50 μL

5455

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此外,我们还可以提供十几种含其他新冠病毒突变位点的假病毒

11992ES70

4×50μL

17285

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11992ES80

20×50 μL

75655

/

 

*我们还可以提供包含以下突变位点的新冠假病毒:N354D,V367F,N354D+D364Y,D614G,D614G+I472V,D839Y,V483A,D614G+L5F,L5F,L8V,G1124V,D614G+A831V,D614G+A879S,W436R,N331Q+N343Q,N501Y,N501Y+D614G,K417N,K417N+E484K+N501Y,E484K,E484K+N501Y,K417T+E484K+N501Y,Y453F,N439K,L452R+E484Q,欢迎咨询订购。

 

六.参考文献

【1】Minghai Chen1 and Xian-En Zhang, Construction and applications of SARS-CoV-2 pseudoviruses: a mini review. Int J Biol Sci. 2021; 17(6): 1574–1580.