细胞周期与细胞凋亡检测试剂盒（Cell Cycle and Apoptosis Analysis Kit）采用了经典的碘化丙啶染色(Propidium staining)方法对细胞周期与细胞凋亡进行分析。

碘化丙啶 (Propidium，PI) 是一种双链DNA荧光染料，其嵌入双链DNA后可以产生荧光，并且荧光强度和双链DNA的含量成正比。细胞内的DNA被PI染色后，可以用流式细胞仪对细胞进行DNA含量测定，根据DNA含量的分布情况，进行细胞周期和细胞凋亡分析。

PI染色后，假设G0/G1期细胞的荧光强度为1，那么含有双份基因组DNA的G2/M期细胞的荧光强度的理论值为2，正在进行DNA复制的S期细胞的荧光强度为1-2之间。凋亡细胞由于细胞核发生浓缩以及发生DNA片段化 (DNA fragmentation) 导致部分基因组DNA片断在染色过程中丢失，因此凋亡细胞PI染色后呈现明显的弱染，即荧光强度小于1，在流式检测的荧光图上出现所谓的sub-G1峰，即凋亡细胞峰。

细胞凋亡也可以用流式细胞仪观察细胞光散射的变化来检测。 细胞发生凋亡时，由于胞浆和染色质浓缩、核碎裂，产生凋亡小体，使细胞的光散射性质发生变化。凋亡前期，染色质皱缩，细胞密度增加，前向角光散射色显著降低。凋亡后期，细胞产生凋亡小体，前向角光散射和侧向角光散色都显著降低。

本试剂盒通常应用于贴壁或悬浮细胞的细胞周期与细胞凋亡检测。如果用于组织的细胞周期与细胞凋亡检测，则必须把组织消化成单细胞状态，才可以进行检测。

便捷、准确

运输：冰袋（wet ice）运输。

保存方法：-20℃避光保存，有效期为2年。

【注】如果需要在短时间内多次重复使用，可以于4℃避光保存，2个月内有效。

Q：这款试剂盒是不是凋亡和周期均可以检测？

A：这款试剂盒是检测细胞周期的，细胞周期检测中细胞内的DNA被PI染色后，可以用流式细胞仪对细胞进行DNA含量测定，根据DNA含量的分布情况，进行细胞周期和细胞凋亡分析。

Q：Staining Solution能否使用PBS或DPBS代替？

A：可以

Q：流式周期结果如何分析？G1,S，G2-M数据分析。G2/G1的数据是有意义吗？

A：一般是G1期数据都基本没有变化，抑制细胞周期的药物处理就是G2/M期增加，S期减少。一般是看各个时期的比值。

Q：流式周期固定的时候能否直接加70-75%的乙醇重悬细胞固定？

A：不可以，如果直接用70-75%的乙醇，会导致固定效果差或者出现细胞固定后无沉淀的现象。建议先用PBS重悬细胞后，再加入无水乙醇稀释到70-75%。

Q：做流式周期的时候，只出现单峰是什么原因？是不是你们的试剂有问题？

A：试剂是没有问题的，能出现峰说明试剂是可以和核酸结合的，只出现单峰或没有G2期，可能原因有以下几点：1.细胞状态，是不是细胞状态较差，建议调整细胞状态之后进行实验。2.细胞密度过密，如果细胞接种的时候过密会导致细胞接触抑制。3.原代细胞，有些原代细胞是没有增值能力的。4.圈门没圈好，建议正确圈门。

Q：流式分析细胞周期，收集了10的6次方细胞，但细胞在乙醇固定之后，还可以看到细胞沉淀的，但PBS洗涤两次之后，就基本没什么细胞沉淀了，上机发现看不到细胞了。这是怎么回事啊？怎么解决这个问题啊？

A：1. 先用冷PBS悬浮细胞，充分悬浮，使细胞充分分散成单细胞。之后缓慢加入预冷的无水乙醇，终浓度为70-75%乙醇。不直接加75%乙醇的原因是：直接加入乙醇会导致细胞团聚的现象，很难重悬成单细胞。乙醇固定之后没有细胞沉淀。

2.很可能是洗细胞的过程中丢失了，解决办法有：采用尖底的离心管和水平离心机。离心后尽量用吸管吸取上清，不要倾倒；吸上清时残留1mm左右的水膜，不要吸完。离心的转速或时间可稍微增加一点儿。每次加溶液时，吸头最好不要接触液面；混匀时最好不要用吸头吹打，以免吸头挂壁带走部分细胞。

Q：试剂盒的 RNase A和 PI的浓度是多少，Staining Solution成分是什么？

A:RNase A和 PI的浓度都是1mg/ml，Staining Solution成分是一些盐溶液配方，配方不告知，用完了可以暂用PBS替代。

Q：周期的各个时期加起来不足100%是什么原因呢？

A：应该是没调好，因为流式是一个动态的过程，首位有点偏差是正常的，差的大可能是圈了一些黏连的细胞，需要去掉这些细胞，或者选择不同的拟合公式，可以调整圈门看看。

Q: 40301ES这款试剂盒buffer里有ATP吗？

A: 试剂盒buffer不含ATP。

Q: 用1000 g的转速离心细胞，细胞死亡怎么办？

A: 可适当降低转速，或直接使用平时实验室常用的转速离心得到细胞。