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400-6111-883
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400-6111-883
Annexin V- Alexa Fluor 488/PI 细胞凋亡检测试剂盒
产品货号:40305ES20
产品规格:​20 T
产品价格:¥386.00
类别:细胞凋亡与吞噬

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  • 产品信息

    产品名称

    货号

    规格

    价格(元)

    促销价(元)

    Annexin V-Alexa Fluor 488/PI Apoptosis Detection Kit  

    Annexin V-Alexa Fluor 488/PI 细胞凋亡检测试剂盒

    40305ES20

    20 T

    518.00

    386.00

    40305ES50

    50 T

    1120.00

    786.00

    40305ES60

    100 T

    1960.00

    1346.00


    产品描述

    Annexin V-Alexa Fluor488/PI细胞凋亡检测试剂盒(Annexin V-Alexa Fluor488/PI Apoptosis Detection Kit)是用Alexa Fluor488标记了的Annexin V作为探针,来检测细胞早期凋亡的发生,可用流式细胞仪或其他荧光检测设备进行检测。

    其检测原理为:在正常的活细胞中,磷脂酰丝氨酸(phosphotidylserine,PS)位于细胞膜的内侧,但在早期凋亡的细胞中,PS从细胞膜的内侧翻转到细胞膜的表面,暴露在细胞外环境中。Annexin-Ⅴ(膜联蛋白-V)是一种分子量为35-36 KD的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白,能与PS高亲和力结合。可通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜结合。

    另外,本试剂盒中还提供了碘化丙啶(Propidium Iodide,PI)用来区分存活的早期细胞和坏死或晚期凋亡细胞。PI是一种核酸染料,它不能透过正常细胞或早期凋亡细胞的完整的细胞膜,但可以透过凋亡晚期和坏死细胞的细胞膜而使细胞核染红。因此,将Annexin V与PI联合使用时,PI 则被排除在活细胞(Annexin V-/PI-)和早期凋亡细胞(Annexin V+/PI-)之外,而晚期凋亡细胞和坏死细胞同时被Alexa Fluor488 和PI 结合染色呈现双阳性(Annexin V+/PI+)。


    产品组分

    编号

    组分

    产品编号/规格

    40305ES20(20T)

    40305ES50(50T)

    40305ES60(100T)

    40305-A

    Annexin V-Alexa Fluor488

    100 μL

    250 μL

    500 μL

    40305-B

    PI Staining Solution (20 μg/mL)

    200 μL

    500 μL

    1.0 mL

    40305-C

    1×Binding Buffer

    10 mL

    25 mL

    50 mL


    运输与保存方法

    冰袋(wet ice)运输。-20 ℃避光长期保存,避免反复冻融,一年有效。

    【注】:如果需要在短时间内多次重复使用,可以在4 ℃避光保存,半年有效。


    注意事项

    1)由于细胞凋亡是一个快速的过程,建议样品在染色后1小时之内进行分析。

    2)对于贴壁细胞,消化是一个关键步骤。贴壁细胞诱导细胞凋亡时如有漂浮细胞,需收集漂浮细胞和贴壁细胞后合并染色。处理贴壁细胞时要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。胰酶消化时间过短,细胞需要用力吹打才能脱落,容易造成细胞膜的损伤,PI摄入过多;消化时间过长,细胞膜同样易造成损伤,甚至会影响细胞膜上磷脂酰丝氨酸与Annexin V-Alexa Fluor488的结合。消化时将胰酶铺满孔板底后,轻摇时胰酶与细胞充分接触,然后倒掉大部分胰酶,利用剩余的少量胰酶再消化一段时间,待细胞间空隙增大,瓶底呈花斑状即可终止。在消化液中尽量不用EDTA,EDTA会影响Annexin V与PS的结合。

    3)如果样品来源于血液,请务必除去血液中的血小板。因为血小板含有PS,能与Annexin V结合,从而干扰实验结果。可以使用含有EDTA的缓冲剂并在200 g离心洗去血小板。

    4)试剂在开盖前请短暂离心,将盖内壁上的液体甩至管底,避免开盖时液体洒落。

    5)Annexin V-Alexa Fluor488和PI是光敏物质,在操作时请注意避光。


    使用说明

    1.1 样品染色

    1. 悬浮细胞:300 g,4 ℃离心5 min收集细胞。

    贴壁细胞:用不含EDTA的胰酶消化后,300 g,4 ℃离心5 min收集细胞。胰酶消化时间不宜过长,以防引起假阳性。

    2. 4 ℃预冷的PBS洗涤细胞2次,每次均需300 g,4 ℃离心5 min。

    3. 吸弃PBS,加入100 μL 1×Binding Buffer重悬细胞。

    4. 加入5 μL Annexin V-Alexa Fluor 488和10 μL PI,轻轻混匀。

    5. 避光、室温反应10-15 min。

    6. 加入400 μL 1×Binding Buffer,混匀后放置于冰上,样品在1小时内用流式细胞仪或荧光显微镜检测。

    【注】:为了避免洗涤细胞时损失细胞,在吸液时可以用大的Tip头套上小的Tip头吸液。

    1.2 流式细胞仪分析

    Alexa Fluor488最大激发波长为488 nm,最大发射波长为519 nm;PI-DNA复合物的最大激发波长为535 nm,最大发射波长为615 nm。用CellQuest等软件进行分析,绘制双色散点图(two-color dot plot),Alexa Fluor488为横坐标,PI为纵坐标。每个样采集10,000 events。

    1.3 荧光显微镜分析

    1) 滴一滴用Annexin V-FITC/PI双染的细胞悬液于载玻片上,并用盖玻片盖上细胞。

    2) 在荧光显微镜下用双色滤光片观察。Annexin V-FITC荧光信号呈绿色,PI荧光信号呈红色。


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    HB200911