MitoTracker Deep Red FM是一种可选择性蓄积于线粒体基质的远红色荧光染料，其通过与线粒体蛋白上半胱氨酸残基的游离巯基共价结合实现染色，此过程不依赖于线粒体膜电位。该类染料的激发/发射波长范围为633/650-750 nm，而MitoTracker Deep Red FM的激发/发射波长分别为644 nm和665 nm。

MitoTracker Deep Red 类染料的激发/发射波长为 633/650-750 nm。MitoTracker Deep Red FM 的激发/发射波长 644/665 nm。

MitoTracker Deep Red FM的配制：

1. 储存液（母液）的配置

用 DMSO 配制 1 mM 的 MitoTracker Deep Red FM储存液，如:50 μg产品，加入91.98 μL DMSO充分溶解，溶液澄清。

【注】MitoTracker Deep Red FM 储存液建议分装后于-20℃或-80℃避光保存，避免反复冻融。-20℃可保存1个月，-80℃可保存6个月。

2. 工作液的配制

用预热好的无血清细胞培养基或 PBS 按照 1:5000-1:50000 稀释储存液，配制成 20-200 nM 的 MitoTracker Deep Red FM 工作液。

【注】工作液现配现用，具体请根据实际实验情况调整工作液配置的浓度，以上浓度仅供参考。

3. 细胞染色

3.1 悬浮细胞的染色

3.1.1 离心收集细胞，加入PBS洗涤2次，每次5 min。细胞密度在 1×10⁶/mL。

3.1.2 加入 1 mL MitoTracker Deep Red FM工作液，室温孵育15~45 min。

3.1.3 离心：400 g，离心3~4 min，弃上清。

3.1.4 加入PBS洗涤细胞2次，每次5 min。

3.1.5 用1 mL无血清培养基或PBS重悬细胞后，使用荧光显微镜或流式细胞仪进行观察。

3. 2 贴壁细胞的染色

3.2.1 将贴壁细胞培养于无菌盖玻片上。

3.2.2 从培养基中移出盖玻片，吸除多余培养基。

3.2.3 加入100 μL染料工作液，轻轻晃动使其完全覆盖细胞，孵育15~45 min。

3.2.4 吸去染料工作液，用培养基洗2-3次，每次5 min，使用荧光显微镜或流式细胞仪进行观察。

-25~-15℃避光保存，有效期3年。