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产品名称: Vaccinia Capping Enzyme牛痘病毒加帽酶
  • 产品货号:10615ES76
  • 产品规格:500 U
  • 产品价格:
  • 类别:RNA合成
   
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    产品名称

    产品编号

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    价格(元)

    Vaccinia Capping Enzyme牛痘病毒加帽酶

    10615ES76

    500 U

    -20

    1256.00

    Vaccinia Capping Enzyme牛痘病毒加帽酶

    10615ES84

    2000 U

    -20

    3856.00

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    10615ES92

    10000 U

    -20

    14856.00

    产品描述

    真核生物中mRNA经转录后修饰5形成一个特殊结构,即帽子结构,该结构对mRNA的稳定、转运与翻译过程均有较重要作用。牛痘病毒加帽酶是催化形成帽子结构的有效酶,其由D1D12两个亚基组成,兼具RNA三磷酸酯酶活性、鸟苷酰基转移酶活性和鸟嘌呤甲基转移酶活性,可将7-甲基鸟嘌呤帽结构(m7Gppp)连接到RNA5末端m7Gppp5N。牛痘病毒加帽酶,在合适浓度的加帽缓冲液Capping buffer鸟苷三磷酸(GTPS-腺苷甲硫氨酸(SAM等存在条件下,能够在一个小时之内对RNA进行加帽,效率可达到100%并且保证正确的方向。

    本品以无菌液体形式提供可应用于体内/外翻译前mRNA的加帽反应或mRNA5末端标记反应

    产品性质

    来源(Source

    携带牛痘病毒加帽酶基因的E. coli

    最适温度(Optimum Temperature

    37℃

    储存缓冲液(Storage Buffer

    20 mM Tris-HCl pH 8.0100 mM NaCl1 mM DTT0.1 mM EDTA0.1% Triton X-10050%甘油

    活性单位定义(Unit Definition

    37℃条件下,1小时内将10 pmol GTPα- 32 P)掺入到一条含80个核苷酸80 nt转录产物上所需要的酶量

    运输和保存方法

    冰袋运输,-20℃保存,有效期1年。

    注意事项

    1)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作

    2)所提取的RNA需经过纯化并使用无核酸酶的水重悬

    3)在加入酶之前需要对RNA溶液进行加热以去除5末端的二级结构

    4对于已知5末端结构RNA,可以延长反应时间至60分钟,提高加帽效率

    55末端标记反应体系中,GTP储液应稀释为反应体系中mRNA摩尔浓度的1-3倍。

    使用方法

    1. 加帽反应

    本步骤适用于10 μg RNA≥ 100 nt)的加帽反应,且可根据实验需要放大。

    110 μg RNA1.5 mL离心管,使用核酸酶的水稀释至15 μL

    265加热5分钟

    3取出离心管置于冰上5分钟;

    4依次加入以下组分:

    组分

    体积

    上述变性的RNA

    15 μL

    10×Capping Buffer

    2.0 μL

    GTP10 mM

    1.0 μL

    SAM2 mM

    1.0 μL

    Vaccinia Capping Enzyme10 U/μL

    1.0 μL

    【注】:10×Capping Buffer配方为:0.5 M Tris-HClpH 8.050 mM KCl10 mM MgCl210 mM DTT

    537°C孵育30分钟;

    6RNA加帽完成,可进行后续实验。

    2. 5末端标记反应

    步骤适用于5末端带有三磷酸的RNA标记,且可根据实验需要放大,其标记效率受反应体系中RNAGTP摩尔浓度比以及RNA样本中GTP含量影响。

    1取适量RNA1.5 mL离心管,使用核酸酶的水稀释至14 μL

    265加热5分钟

    3)取出离心管置于冰上5分钟;

    4依次加入以下组分:

    组分

    体积

    上述变性的RNA

    14 μL

    10×Capping Buffer

    2.0 μL

    GTP mix

    2.0 μL

    SAM2 mM

    1.0 μL

    Vaccinia Capping Enzyme10 U/μL

    1.0 μL

    【注】:GTP mixGTP和少量标记物,其中GTP使用浓度参照注意事项5)。

    537°C孵育30分钟;

    6RNA 5末端标记完成可进行后续实验

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