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产品名称: Animal Tissue Direct PCR Kit 动物组织直接PCR试剂盒
  • 产品货号:10180ES50
  • 产品规格:50 T
  • 产品价格:
  • 类别:常规PCR
   
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  •  产品信息

    产品名称

    产品编号

    规格

    价格(元)

    Animal Tissue Direct PCR Kit

    10180ES50

    50T

    326.00

    Animal Tissue Direct PCR Kit

    10180ES70

    200T

    755.00

    产品描述

    动物组织直接PCR试剂盒是一款可直接对不同动物组织进行PCR扩增的试剂盒,适应性广、稳定性强。试剂盒采用独特的裂解缓冲液体系,可以快速的裂解多种动物组织样品并释放出基因组DNA,不需要除去蛋白、RNA等,即可将释放出的基因组DNA作为模板直接用于PCR反应。此外,样品使用量少,低至5 mg动物组织即可进行实验。

    本试剂盒中提供的2× Tissue Master Mix具有很强的扩增兼容性,能直接以待测样品裂解液为模板,进行高效特异性扩增。该试剂为2倍浓缩PCR反应混合液,包含了用于PCR扩增除模板和引物外的所有组分,大大简化操作过程,降低污染几率。

    该试剂盒可用于转基因型鉴定、动物基因分型等。

    产品组分

    类别

    编号

    组分

    产品编号/规格

    储存

    10180ES5050T

    10180ES70200T

    Part I

    10180-A

    Buffer AL

    5mL

    20mL

    室温或4

    10180-B

    Protease

    220μL

    880μL

    4

    10180-C

    6× DNA Loading Buffera

    375μL

    1.5mL

    4℃或-20

    Part II

    10180-D

    2×Tissue MasterMixb

    500μL

    2 × 1mL

    -20

    a6× DNA Loading buffer:不含SDS

    b2× Tissue Master Mix包含Taq DNA聚合酶、dNTP混合物、MgCl2、反应缓冲液、PCR反应增强剂、优化剂以及稳定剂等。

    运输方法

    冰袋运输。

    保存方法

    1. 试剂10180-A【Buffer AL】,在常温干燥条件下,可保存12个月,如需保存更长时间可置于4。低温保存,易出现沉淀,可平衡至室温或37℃水浴10min,待沉淀溶解后,混匀使用。

    2. 试剂10180-BProtease】,具有独特配方,为保证其更好的活性和稳定性,建议4℃保存,切勿置于-20℃

    3. 试剂10180-CDNA Loading Buffer】,可置于4℃-20℃长期保存。

    4. 试剂10180-DTissue Master Mix-20℃保存,避免反复冻融。

    操作方法

    样品基因组DNA释放

    1. 在离心管中加入100μL Buffer AL4μL Protease,轻轻涡旋混匀。

    】:Buffer ALProtease混合后尽快使用,不宜长期保存。

    2. 5-10mg动物组织,置于上述离心管中,轻轻涡旋混匀。

    】:组织应尽量剪碎,以便酶解反应更顺利进行。

    3. 65孵育10-30min,然后95处理5min

    】:65孵育,一般10min即可满足多数PCR需求。若需要的DNA量较大或样品较难酶解,可将时间延长至30min。组织块不需完全酶解,残余的部分在后续离心步骤中可被除去。

    4. 12000rpm离心5min

    5. 将上清转移至新的离心管,4-20保存或直接用于PCR扩增。

    PCR反应鉴定——PCR反应体系

    组分

    体积(μL

    体积(μL

    终浓度

    2× Tissue Master Mix

    10

    25

    Forward Primer (10μM)

    0.5

    1

    0.2-0.25μM

    Reverse Primer (10μM)

    0.5

    1

    0.2-0.25μM

    裂解产物(DNA模板)

    2

    5

    -

    ddH2O

    To 20

    To 50

    -

    】:各组分使用前应充分混匀。

    a模板使用量:建议1-10%总体系。避免超过总体系的20%

    b引物终浓度0.2-0.25μM可以得到较好结果。反应性能较差时,可在0.1-0.5μM范围内调整引物浓度。

    c反应体系:推荐使用20μL50μL,以保证目的基因扩增的有效性和重复性。

    d体系配制:配制好PCR反应体系,置于涡旋仪上涡旋混匀,瞬时离心将反应液集于管底。

    e对照反应:建议进行PCR时,设置阳性和阴性PCR对照反应以便于排除假阳性或假阴性的干扰。

    PCR反应鉴定——PCR反应条件

    循环步骤

    温度

    时间

    循环数

    预变性

    94

    5min

    1

    变性

    94

    10sec

    30-40

    退火

    50-65

    20sec

    延伸

    72

    30sec/kb

    终延伸

    72

    5min

    1

    【注】:a退火温度:请参考引物的理论 Tm 值,退火温度可设置低于引物理论值2-5℃。

    b延伸时间:需要根据片段的长度来确定,对于1kb以内的DNA片段,建议延长时间为30sec

    注意事项

    1. 建议使用新鲜采取的动物组织,若为长期冷冻组织,应尽量避免反复冻融,否则会导致模板的降解,影响PCR效率。

    2. 试剂Buffer AL若低温保存,易产生沉淀。在使用前务必将其在室温中放置一段时间,也可在37水浴中预热10min,以溶解沉淀,混匀后再使用。

    3. 电泳检测时,切勿使用含有SDSLoading Buffer。否则,电泳时会在泳道中出现一大团拖尾亮带,影响实验结果。

    4. 为了您的安全和健康,请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

     

    常见问题与解决方法

    常见问题

    可能原因

    解决方法

    阳性对照、待测样本均无条带。

    PCR反应体系或反应条件不合适。

    使用梯度PCR摸索PCR最佳反应条件。

    PCR试剂保存不当失去活性。

    2× PCR Mix应保存于-20,使用时避免反复冻融。若使用频繁,可在4短时间存放。

    引物设计问题。

    尝试重新设计引物进行检查。

    阳性对照有目的条带,待测样本无条带或条带弱。

    不当储存或长期储存引起试剂活性丧失。

    使用新鲜的试剂。

    加入组织裂解液过量。

    增大反应体系,或减少裂解液的用量。

    样本裂解混合液保存不当或保存时间过久,DNA基因组已经降解。

    裂解混合液液可在4℃保存2-3天,尽量使用新制备的裂解液混合液进行PCR

    模板加入量不适合。

    在反应体系10-20%范围内优化模板加入量。反应效性能较差时,可以降模板浓度调节到低于10%的范围。

    PCR循环数不足。

    适当增加PCR的循环数,推荐在35-40循环为佳。因为模板复杂,一般PCR反应要比用纯化的 DNA模板多5-10个循环为佳。

    非特异性扩增

    PCR退火温度太低,循环数、引物浓度或模板浓度太高。

    增加PCR退火温度,降低PCR循环数、引物浓度或模板浓度。

    PCR引物错配。

    重新设计PCR引物。

    配制PCR反应体系时温度太高或配制完成后放置时间太久。

    PCR反应体系的配制在低温下进行,配制完成后尽快进行PCR扩增反应。

    阴性对照出现目的条带

    操作工具或试剂污染。

    实验所有试剂或器材均应高压灭菌。操作时应小心轻柔,防止将靶序列吸入加样枪内或溅出离心管外。

    样本间交叉污染。

    每个取样器只对一个样本使用;或取完一个样本后,将取样器刃口浸入2%的次氯酸钠溶液中,反复涮洗,然后用干净的纸巾擦干残液。

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    产品货号

    产品名称

    规格

    价格(元)

    10180ES50

    Animal Tissue Direct PCR Kit 动物组织直接PCR试剂盒

    50T

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