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产品名称: BCA Protein Quantification Kit BCA蛋白浓度测定试剂盒(增强型)
  • 产品货号:20201ES76
  • 产品规格:500T
  • 产品价格:
  • 类别:蛋白定量
   
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    产品名称

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    价格(元)

    BCA Protein Quantification Kit BCA蛋白浓度测定试剂盒(增强型)

    20201ES76

    500T

    室温

    288.00

    BCA Protein Quantification Kit BCA蛋白浓度测定试剂盒(增强型)

    20201ES86

    2500T

    室温

    818.00

    BCA Protein Quantification Kit BCA蛋白浓度测定试剂盒(增强型)

    20201ES90

    5000T

    室温

    1518.00

    产品描述

    BCABicinchoninic acid)法是目前应用比较广泛的蛋白质浓度测定方法。基于双缩脲反应,即在碱性环境下蛋白质将Cu2+还原成Cu+,产生一种紫蓝色复合物,在562nm处有高的吸光值,该反应产物的量与蛋白质浓度成正比。BCA蛋白浓度测定法实现了蛋白质浓度测定的简便、灵敏、快速和稳定性。试剂盒中提供的蛋白标准品为用户制作标准曲线提供了便利。

    BCA蛋白浓度测定试剂盒可用于比色皿法检测,也可用于微孔板法检测。前者虽需较大量(100μl)的蛋白样品,但由于其在检测中使用蛋白样品与BCA工作液的比率为1:20v/v),从而降低干扰物质带来的影响。后者操作简单方便,仅需少量(10-25μl)的蛋白样品。不过,由于其在检测中使用蛋白样品与BCA工作液的比率为1:8v/v),某种程度上限制干扰物质的承受浓度以及降低最低检测水平。我司提供三种规格的BCA蛋白浓度检测试剂盒,比色皿法分别可做50次,250次,500次。酶标法分别可做500次,2500次,以及5000次。

    产品特点

    1)灵敏度高,最小检测蛋白量可达0.2μg,检测浓度下限达到10μg/ml

    2)速度快,比一般的BCA蛋白浓度测定试剂盒显色所用时间短。比传统的Lowry法检测速度约快4倍。

    3)线性范围广,20-2000μg/ml浓度范围内有较好的线性范围。

    4)不受大部分样品中的化学物质的影响,可以兼容样品中5%SDS5%Triton X-1005%Tween 206080等。(详情见附录

    产品组分

    编号

    组分

    产品编号/规格

    20201ES76500T

    20201ES862500T

    20201ES905000T

    20201-A

    BCA试剂A

    100ml

    500ml

    2×500ml

    20201-B

    BCA试剂B

    3ml

    15ml

    2×15ml

    20201-C

    蛋白标准品BSA

    5×1ml2mg/ml

    10×1ml2mg/ml

    10×2ml2mg/ml

    运输与保存方法

    室温运输。试剂盒室温保存即可,其中短期不用的蛋白标准品(BSA)也可放到4 ºC保存。有效期12个月。

    注意事项

    1)使用BCA蛋白测定法测定时颜色会随着时间的延长不断加深,并且显色反应的速度和温度有关,因此需注意保持定时和定温,以确保精确定量。

    2)低温或长期保存,若发现BCA试剂A或者试剂B有沉淀发生。请37ºC温育并伴随搅拌促使其充分溶解。如发现细菌污染,则应丢弃,避免对实验结果造成影响。

    3)实验操作规范,提高上样量的精确度。

    4)每次测定都需做相应的标准曲线,因为显色反应与温度和时间的变化有关,精准的蛋白定量宜每次都做标准曲线。

    操作方法

    一、配制标准品和工作液

    1. 配制BSA标准品体系

    注:标准品稀释液为蛋白样品的溶解液,原则上蛋白样品在什么溶液中,标准品也宜用什么溶液稀释。但也可用0.9%NaCl1×PBS进行稀释。

    BSA标准品体系配制可参考表一。

    表一BSA标准品体系配制(微孔板检测,线性范围20-2000μg/ml*

    Vial

    稀释液体积(μl)

    2mg/ml BSA体积(μl)

    BSA终浓度(μg/ml)

    A

    0

    100

    2000

    B

    25

    75

    1500

    C

    50

    50

    1000

    D

    125

    75

    750

    E

    150

    50

    500

    F

    350

    50

    250

    G

    375

    25

    125

    H

    395

    5

    25

    I

    400

    0

    0=Blank

    *如用比色皿检测,每管需加100μl标准品,按3个重复计算,每个浓度至少需配制300μl

    2. 配制BCA工作液

    1)计算所需要的BCA工作液体积。

    BCA工作液体积=(标准品+待测样品)×重复数×每个样品所需要的BCA工作液

    注:比色皿检测时每个样品加2.0ml BCA工作液,微孔板检测每个样品加200μl BCA工作液。

    2)配制BCA工作液:50体积的BCA试剂A中加入1体积的BCA试剂BA:B=50:1 ,充分混匀。

    注:BCA试剂B加入BCA试剂A中后,迅速浑浊,通过混匀后立即变澄清。BCA工作液装入密封容器内,室温条件24h稳定。

    二、检测方法

    1. 比色皿检测方法(样品:BCA工作液=1:20

    1)各取100μl标准品和待测样品加入到反应管中。

    2)每管加入2.0ml BCA工作液,混匀。37孵育30min

    注意:也可室温孵育2h,或者60℃孵育30minBCA检测蛋白浓度,延长孵育时间会加深颜色反应。升高温度会加快显色反应。但是温度升高和时间延长会降低检测下限,以及降低工作线性范围。若蛋白浓度很低,可在较高温度孵育或者适当延长孵育时间。

    3)冷却到室温。在分光光度计上进行检测,设定波长为562nm。用装满水的比色皿对仪器校零。然后在10分钟内对所有样品读数。

    注意:由于BCA反应达不到真正的反应终点,即使温度降低至室温生色反应液会继续。但是,由于室温下生色比率相当低,因此若是10min内能对所有的样本进行562nm吸光度的测试,不会导致明显错误。

    4)根据BSA标准品的吸光度(减去标准品中空白孔的OD值即最终的读数),绘制标准曲线(X-蛋白浓度ug/mlY-最终的OD562nm)。依据标准曲线和样品的稀释倍数计算样品蛋白浓度。

    2. 微孔板检测方法(样品:BCA工作液=1:8

    1)各取25μl标准品和待测样品加入到微孔板中。

    注:样品与工作液比例为1:8,若样品有限,可使用10μl标准品和待检测样品进行检测(即1:20),这时试剂盒的检测范围为125-2000μg/ml

    2)每孔加入200μl BCA工作液,振荡30s充分混匀。盖上微孔板,37孵育30min

    3)冷却到室温,在酶标仪上的540595nm波长范围处检测吸光度,其中562nm波长为最佳。

    注意:a)由于酶标板的光径比比色皿短,使得酶标板检测需要更好的样品:BCA工作比率来获得相同的检测灵敏度。若使用高于562nm的检测波长,建议延长孵育时间到2hb)延长孵育时间或者提高样品:BCA工作比会增高每个孔的OD562nm净值,并且降低检测下限和工作线性范围。

    4)根据BSA标准品的吸光度(减去标准品中空白孔的OD值即最终的读数),绘制标准曲线(X-蛋白浓度ug/mlY-最终的OD562nm)。依据标准曲线和样品的稀释倍数计算样品蛋白浓度。

    附录          

    表:BCA蛋白浓度测定的兼容性

    名称

    耐受浓度

    Sodium bicarbonate  

    100 mM

    Sodium phosphate    

    25 mM

    2-Mercaptoethanol 

    0.01%

    Glycercol (pure) 

    10%

    Glycine-HCl, pH 2.8 

    100 mM

    HEPES 

    100 mM

    Hydrochloric acid 

    100 mM

    Leupeptin

    10 mg/L

    Nickel chloride (in TBS, pH8.0)

    10 mM

    Nonidet P-40 (NP-40) 

    5% (w/v)

    Octyl β -glucoside

    5% (w/v)

    Potassium thiocyanate

    3.0 M

    SDS  

    5%

    Sodium acetate, pH 4.8  

    200 mM

    Sodium azide

    0.20%

    Sodium hydroxide  

    100 mM

    Sucrose  

    40%

    Triton X-100  

    5%

    Triton X-114, X-305,X-405

    1%

    Tween-20, Tween-60, Tween-80

    5%

    Zwittergent

    1%

    ACES, pH 7.8 

    25 mM

    Acetone  

    10%

    Acetonitrile   

    10%

    Ammonium sulfate  

    1.5 mM

    Aprotinin

    10 mg/L   

    Bicine, pH 8.4  

    20 Mm

    Bis-Tris, pH 6.5   

    33 mM

    Borate, pH 8.5   

    50 mM

    Brij-35

    5%

    Brij-52

    1%

    Brij-56, Brij-58

    1%

    BugBuster protein Extraction Reagent (Cat. No. 70584)

    no interference (undiluted)


     

    Calcium chloride (in TBS, pH 8.0)

    10 mM

    CelLytic B Reagent

    no interference (undiluted)

    Cesium bicarbonate   

    100 mM

    CHAPS  

    5%

    Cobalt chloride (in TBS, pH 8.0) 

    0.8 mM

    CytoBuster Protein Extraction Reagent (Cat. No. 71009)

    no interference (undiluted)

    Deoxycholic acid

    5%

    Dithioerythritol (DTE)  

    1 mM

    Dithiothreitol (DTT)  

    1 mM

    DMF  

    10%

    DMSO 

    10%

    EDTA  

    10 mM

    EPPS, pH 8.0  

    100 mM

    Ethanol  

    10%

    Ferric chloride (in TBS, pH 8.0)

    10 mM

    Glucose  

    10 mM

    Glycerol

    10%

    Guanidine-HCl

    4 M

    Imidazole, pH 7.0  

    50 mM

    MES, PH6.1

    100mM

    Methanol

    10%

    MOPS, pH7.2

    100mM

    N-Acetyglucosamine(10mM)in PBS, pH7.2

    10mM

    Octyl β-thioglucpyranoside

    5%

    PIPES, pH6.8

    100mM

    PMSF 

    1 mM

    PopCulture Reagent (Cat. No. 71092) 

    no interference (undiluted)

    Reportasol Extraction Buffer (Cat. No. 70909) 

    no interference (undiluted)

    Sodium chloride

    1 M 

    Sodium citrate, pH 4.8 or pH 6.4 

    200 mM

    Sodium ortho-vanadate in PBS, pH7.2

    1mM

    Span 20

    1%

    TBS (150 mM NaCl, 100 mM Tris-HCl, pH 8.0)

    no interference (undiluted)

    Thimerosal

    0.01%

    TLCK

    0.1mg/L

    TPCK

    0.1mg/L

    Tricine, pH 8.0 

    25 mM

    Triethanolamine, pH 7.8 

    25 mM

    Tris

    250 mM

    Tris(hydroxypropyl)phosphine (THP)

    1 mM

    Urea

    3M

    Zinc chloride (in TBS, pH 8.0)

    10 mM