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产品名称: Hieff NGSTM cfDNA Clean Beads (100-200 bp)
  • 产品货号:12599ES03
  • 产品规格:1 mL
  • 产品价格:
  • 类别:磁珠与建库模块
   
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    产品名称

    产品编号

    规格

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    价格(元)

    Hieff NGSTM cfDNA Clean Beads (100-200 bp)

    12599ES03

    1 mL

    4℃

    466.00

    Hieff NGSTM cfDNA Clean Beads (100-200 bp)

    12599ES08

    5 mL

    4℃

    1666.00

    Hieff NGSTM cfDNA Clean Beads (100-200 bp)

    12599ES56

    60 mL

    4℃

    9106.00

    产品描述

    cfDNA提取过程中,常会引入大片段DNAgDNA的污染。常规情况下,这些污染物可以通过对目的片段进行磁珠分选回收而去除。但是,由于cfDNA仅有170 bp左右,常用的AMPure XPSPRI Select磁珠对100-200 bp的回收效率较低无法获得理想的cfDNA回收效果

    Hieff NGSTM cfDNA Clean Beads (100-200 bp)是针对上述问题的解决而专门设计的磁珠类产品,其基于SPRI (Solid Phase Reverse Immobilization)原理制备,配合精心优化的缓冲体系和已经验证的操作体系,可精确回收100-200 bp cfDNA,有效去除大片段DNAgDNA的污染,同时具有操作简单、回收率高(>95%等优势使用本品获得的cfDNA产物,可直接应用二代测序文库构建、克隆、酶切、连接等反应。本产品中提供的所有试剂组分均经过严格质检,最高程度保障产品优异性能与批间稳定性。

    运输与保存方法

    冰袋运输。2-8℃保存,效期一年避免冷冻

    注意事项

    1)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

    2)磁珠使用前须在室温平衡至少30 min

    380%乙醇需现用现配,否则将影响回收效率。

    4)进行长度分选时,初始样品体积≥50 μL,不足时请用超纯水补齐。样品体积太小将导致移液误差增大,进而影响分选的准确性

    使用方法

    1. 准备工作

    将磁珠由冰箱中取出,室温平衡至少30 min配制80%乙醇。

    2. 长度分选(双轮法)

    长度分选操作流程如1所示,具体操作如下。

     
     

    1 双轮分选操作流程。

     

    1磁珠cfDNA片段回收推荐比例

    cfDNA片段长度

    100-200 bp

    第一轮体积比(Beads:DNA

    0.47×

    第二轮体积比(Beads:DNA

    0.33×

    ×表示样品DNA体积。若样品DNA体积为100 mL,则第一轮磁珠使用体积为0.47×100 mL=47 mL;第二轮磁珠使用体积为0.33×100 mL=33 mL

    1)请涡旋振荡或充分颠倒磁珠以保证混匀。

    2根据要求,参考1DNA溶液中加入第一轮分选磁珠,涡旋混匀或移液器吹打10次混匀

    3室温孵育5 min

    4将离心管短暂离心并置于磁力架中,待溶液澄清后5 min,小心转移上清到干净的离心管中注意:转移上清时,请勿吸取磁珠,即使微量残留都将影响后续文库质量。】

    5参考1向上清中加入第二轮分选磁珠

    6涡旋混匀或移液器吹打10次混匀,室温静置5 min

    7将离心管短暂离心并置于磁力架中待溶液澄清后5 min,小心移除上清

    8保持EP管始终处于磁力架中,加入200 μL新鲜配制的80%乙醇漂洗磁珠室温孵育30 sec,小心移除上清

    9重复步骤8

    10保持离心管始终处于磁力架中,开盖干燥磁珠至刚刚出现龟裂(约5 min注意切记磁珠不要干燥时间太久,磁珠干燥过度将影响纯化效果。】

    11将离心管从磁力架中取出,加入适量ddH2O≥20 μL涡旋振荡或使用移液器轻轻吹打充分混匀,室温静置5 min

    12将离心管短暂离心并置于磁力架中分离磁珠和液体。待溶液澄清后5 min,小心吸取上清至干净的管中即完成分选

    3. 文库大小分选参考条件

    使用Hieff NGSTM cfDNA Clean Beads0.47×/0.33×的双轮分选比例,回收100-200 bp DNA片段。结果显示:Hieff NGSTM cfDNA Clean Beads的回收率高达95%以上(2),且几乎完全去除了大片段污染(2

     

    2. 模拟cfDNA纯化结果。

    阴性对照为20 bp ladder100 bp ladder等比例混合物(红色),使用cfDNA Clean Beads对混合物进行0.47×/0.33×分选(绿色和蓝色,平行重复)。

    2. 双轮回收后100-200 bp各片段的回收率统计

    DNA片段位置

    片段信号值FU

    回收率

    对照

    0.47×/0.33×回收

    P1

    3.9

    3.7

    3.9

    3.8

    97.44%

    P2

    3.1

    3.2

    2.9

    3.05

    98.39%

    P3

    3.1

    2.9

    3.0

    2.95

    95.16%

    P4

    3.1

    3.0

    3.0

    3.0

    96.77%

    HB170811