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产品名称: Hieff NGS™ Fast-Pace End Repair/dA-Tailing Module 快速末端修复/A尾添加模块
  • 产品货号:12608ES24
  • 产品规格:24T
  • 产品价格:
  • 类别:磁珠与建库模块
   
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    价格(元)

    Hieff NGSTM Fast-Pace End Repair/dA-Tailing Module

    快速末端修复/A尾添加模块

    12608ES24

    24T

    -20℃

    2066.00

    12608ES96

    96T

    -20℃

    6166.00

    产品描述

    Hieff NGSTM Fast-Pace End Repair/dA-Tailing Module针对Illumina®高通量测序平台文库构建而专业设计的DNA末端修复/A尾添加模块,具有高效、快速、易实现自动化的优势。本产品兼1 ng-1 μg片段化Input DNA,可在单管内实现片段化DNA的末端补平、5端磷酸化和3端加A尾反应,得到5末端含磷酸基团3端带有dA突出的DNA产物。该产物无需纯化,即可使用Hieff NGSTM Fast-Pace DNA Ligation ModuleCat#12607)进行文库构建接头连接反应。

    本产品已Hieff NGSTM Fast-Pace DNA Ligation ModuleCat#12607),2×Hieff CanaceTM High-Fidelity PCR Master MixCat#12620)共同用于DNA文库构建,通过Illumina®高通量平台测序验证其有效性。产品中提供的所有试剂组分均经过严格质检,最高程度保障产品优异性能与批间稳定性。

    产品组分

    组分名称

    24 T

    96 T

    End Repair/dA-Tailing Buffer

    144 μL

    576 μL

    End Repair/dA-Tailing Enzyme

    96 μL

    384 μL

    质量控制

    Fast-Pace End Repair/dA-Tailing Enzyme 

    1. SDS-PAGE纯度:>95%

    2. 核酸内切酶活性50 μL反应体系中加入10 μL本酶和1 μg φX174 RF I DNA37°C孵育4小时。经琼脂糖凝胶电泳检测,RF II转化比率<10%

    3. 磷酸酶活性:在磷酸酶活性检测缓冲液中加入10 μL本酶和2.5 mM对硝基苯磷酸,37°C孵育4小时。经光谱测定法检测,405 nm处无对硝基苯阴离子特征吸收峰。

    4. 功能活性:在1×Fast-Pace End Repair/dA-Tailing Enzyme中加入1 μL本酶和0.5 μg包含53突出末端的片段化DNA25°C孵育20分钟。经毛细管电泳检测,末端修复、加dA尾并磷酸化的DNA比率>95%

    Fast-Pace End Repair/dA-Tailing Buffer

    1. 16小时孵育检测:50 μL反应体系中包含1×Fast-Pace End Repair/dA-Tailing Buffer1 μg HindIII-λDNA37°C孵育16小时。经琼脂糖凝胶电泳检测,条带无降解;50 μL反应体系中包含1×Fast-Pace End Repair/dA-Tailing Buffer1 μg T3 DNA37°C孵育16小时。经琼脂糖凝胶电泳检测,条带无降解。

    2. 核酸内切酶活性50 μL反应体系中包含1×Fast-Pace End Repair/dA-Tailing Buffer1 μg φX174 RF I DNA37°C孵育4小时。经琼脂糖凝胶电泳检测,RF II转化比<10%

    3. RNase活性:在1×Fast-Pace End Repair/dA-Tailing Buffer中加入40 ng FAM-RNA37°C孵育16小时。经聚丙烯酰胺凝胶电泳检测,条带无降解。

    4. 磷酸酶活性:在磷酸酶活性检测缓冲液中加入1×Fast-Pace End Repair/dA-Tailing Buffer2.5 mM对硝基苯磷酸,37°C下孵育4小时。经光谱测定法检测,405 nm处无对硝基苯阴离子特征吸收峰。

    测序验证

    本品Hieff NGSTM Fast-Pace DNA Ligation ModuleCat#12607),2×Hieff CanaceTM High-Fidelity PCR Master MixCat#12620)共同用于DNA文库构建,已通过Illumina®高通量平台测序验证其有效性。

    运输与保存方法

    冰袋运输。-20℃保存,效期1

    注意事项

    为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

    使用方法

    1. 将表1中各试剂解冻后,颠倒混匀,置于冰上备用。

    2. 于无菌PCR管中配制表1所示反应体系。

    1 末端修复/dA尾添加PCR反应体系

    名称

    体积(μL

    Fragmented DNA

    x

    End Repair/dA-Tailing Buffer

    6

    End Repair/dA-Tailing Enzyme

    4

    ddH2O

    Up to 60 μL

    3. 使用移液器轻轻吹打或振荡混匀,并短暂离心将反应液离心至管底。

    4. 将上述PCR管置于PCR仪,设置表2所示反应程序,进行末端修复/dA尾添加反应。

    2 末端修复/dA尾添加PCR反应程序

    温度

    时间

    热盖105°C

    On

    20°C

    30 min

    65°C

    30 min

    4°C

    Hold

    5. 产物如需纯化,可使用Hieff NGSTM DNA Selection BeadsCat#12601AMPure XP BeadsCat#A63880或其他等效产品

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    产品编号

    规格

    价格(元)

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    12600ES03

    1 mL

    386.00

    12600ES08

    5 mL

    1386.00

    12600ES56

    60 mL

    7586.00

    12600ES75

    450 mL

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    12601ES08

    5 mL

    986.00

    12601ES56

    60 mL

    6286.00

    12601ES75

    450 mL

    26186.00

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    20 T

    1466.00

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    12606ES20

    20 T

    1766.00

    Hieff NGSTM Fast-Pace DNA Ligation Module

    12607ES24

    24 T

    3266.00

    12607ES96

    96 T

    10866.00

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    12609ES50T

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    1466.00

    Hieff NGSTM Single-Indexed Adapter Kit for Illumina®, Set 1

    12611ES24

    24 T

    1166.00

    12611ES96

    96 T

    4366.00

    Hieff NGSTM Single-Indexed Adapter Kit for Illumina®, Set 2

    12612ES24

    24 T

    1166.00

    12612ES96

    96 T

    4366.00

    Hieff NGSTM Dual-Indexed Adapter Kit for Illumina® 

    12614ES96

    96 T

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    12615ES04

    12×4 T

    1256.00

    12615ES16

    12×16 T

    4536.00

    Hieff NGSTM Complete Adapter Kit for Illumina®, Set 2 

    12616ES04

    12×4 T

    1256.00

    12616ES16

    12×16 T

    4536.00

    2×Super CanaceTM High-Fidelity Mix for Library Amplification

    12620ES03

    1ml

    526.00

    12620ES08

    5×1ml

    1426.00

     

    版本号:HB170720